[發明專利]一種多激素聯合定量檢測卡及其制備方法和使用方法

在審

• 申請號: 201910156300.1
• 申請日: 2019-03-01
• 公開（公告）號: CN109752538A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 周輝
• 申請（專利權）人: 周輝
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/58;G01N33/533
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

1.一種多激素聯合定量檢測卡，包括底卡和面卡，其特征在于，所述底卡上設有：加樣區，與加樣區連接的多個結合區，通過時間閥與結合區一一對應連接的多個檢測區；與多個檢測區一一對應直接連接的多個廢液區；

所述結合區、檢測區及廢液區的底部均并聯有微通道；

所述結合區及檢測區底部并聯的微通道均連接時間閥；

所述面卡上設有加樣孔和觀察孔，加樣孔的位置與底卡加樣區對應，觀察孔的位置與底卡檢測區對應。

2.根據權利要求1所述的多激素聯合定量檢測卡，其特征在于，所述結合區和檢測區均為3個，結合區A、B、C分別噴涂有熒光微球A標記的抗抗睪酮抗體、熒光微球B標記的抗雌二醇抗體、熒光微球C標記的抗催乳素抗體；檢測區A、B、C分別包被有抗睪酮抗體、抗雌二醇抗體、抗催乳素抗體。

3.根據權利要求1或2所述的多激素聯合定量檢測卡，其特征在于，所述加樣區覆蓋圓形濾紙；所述圓形濾紙直徑為1.5-2.0cm、孔徑為1-3μm。

4.根據權利要求1或2所述的多激素聯合定量檢測卡，其特征在于，所述微通道通過軟光刻技術和微流控芯片技術制備，所述微通道孔徑為10-15μm；所述時間閥孔徑為5μm。

5.根據權利要求1或2所述的多激素聯合定量檢測卡，其特征在于，所述的底卡和面卡材質為PDMS；所述底卡和面卡的背面扣合連接。

6.根據權利要求1-5任意一項所述的多激素聯合定量檢測卡的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

(1)底卡的制備：

(1-1)制圖；

(1-2)掩模；

(1-3)光刻；

(1-4)再鑄模；

(1-5)軟光刻；

(2)在底卡的結合區分別噴涂熒光微球標記的抗體；

(3)在底卡的檢測區分別包被抗體；

(4)在加樣區和廢液區覆蓋濾紙；

(5)將所述底卡和面卡的背面扣合連接。

7.根據權利要求6所述的多激素聯合定量檢測卡的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)具體包括以下步驟：

(1-1)制圖：微通道圖形按照設計通過繪圖軟件繪制掩膜版圖；

(1-2)掩模：制成掩膜版圖后，打印在透明膠片上制得光刻掩膜板,利用此掩膜板通過光刻工藝制作硅片模具；

(1-3)光刻：在基片表面鍍上一層阻擋層，再用甩膠機在阻擋層上均勻地甩上一層光敏材料-光刻膠；在光掩模上制備所需的通道圖案；將光掩模復蓋在基片上，用紫外光照射涂有光刻膠的基片，光刻膠發生光化學反應；用光刻膠配套顯影液通過顯影的化學方法除去經曝光的光刻膠；烘干后，利用未曝光的光刻膠的保護作用，采用化學腐蝕的方法在阻擋層上精確腐蝕出底片上平面二維圖形，制成所需硅片模具；

(1-4)再鑄模：通過將彈性材料涂于光刻形成的硅片模具表面，干燥后取下則硅片模具表面上圖形轉移到彈性材料上形成印模；

(1-5)軟光刻：將PDMS前聚體與固化劑按10:1比例混合，攪拌混勻后，置于真空箱內脫除氣泡，然后在印模上澆注，PDMS前聚體在印模上完全攤平后，將其連同印模一起放入烘箱內進行固化，置于80℃烘箱固化約48小時，之后將PDMS基片從印模上剝離下來。

8.根據權利要求1-5任意一項所述的多激素聯合定量檢測卡的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)將血清標準品包裹成5μm的水包水微液滴，配制成5個以上的一系列濃度，用同一批次的數張檢測卡檢測各濃度的標準品溶液，以檢測區的熒光強度為縱坐標，血清標準品溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線并將標準曲線保存在多色熒光分析儀中；

(b)樣品檢測:以與步驟(a)中同樣的方法將待測樣品包裹成5μm的水包水微液滴，平放檢測卡，待測樣品平衡至室溫后，用已滅菌的膠頭滴管吸取一定量待測樣品加入加樣孔中，立即將檢測卡放入多色熒光檢測儀中，記錄熒光微球在最佳激發光源的激發下所發出的熒光值；

(c)將所得數值代入已保存在多色熒光分析儀中的標準曲線，根據公式計算得到樣本中待測物的濃度。