[發明專利]一種人成纖維細胞生長因子18及其可溶性重組表達方法、制備方法、制劑和應用

有效

• 申請號: 201910154313.5
• 申請日: 2019-03-01
• 公開（公告）號: CN109836487B
• 公開（公告）日: 2022-06-17
• 發明（設計）人: 曾鑫;曹宇;覃曉蘭;蔡春淞;范玲玲;范開
• 申請（專利權）人: 重慶派金生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/50
• 分類號: C07K14/50;C12N15/70;C07K1/18;C07K1/22;A61K38/18;A61P19/02;A61P29/00
• 代理公司: 重慶中之信知識產權代理事務所(普通合伙) 50213
• 代理人: 袁慶民

1.一種人成纖維細胞生長因子18，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種如權利要求1所述的人成纖維細胞生長因子18的可溶性重組表達方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)選用含T7啟動子的質粒作為表達載體、大腸桿菌作為宿主菌；

(2)構建包含編碼SEQ ID NO:1對應氨基酸序列的核酸分子的重組質粒，將重組質粒轉入大腸桿菌宿主菌，篩選重組表達菌菌株；

(3)誘導重組表達菌菌株表達，其中，誘導表達條件為：溫度15～30℃、乳糖或IPTG誘導、誘導培養時間4～16小時。

3.一種如權利要求1所述的人成纖維細胞生長因子18的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)利用壓力勻漿低溫破碎菌體，離心收集上清；

(2)采用陰離子層析捕獲上清中所述人成纖維細胞生長因子18；

(3)補入二硫鍵配對促進劑；

(4)所述人成纖維細胞生長因子18中的二硫鍵正確配對后，進行肝素親和層析捕獲目的產物人成纖維細胞生長因子18；

其中，所述菌體為表達所述人成纖維細胞生長因子18的菌株，所述二硫鍵配對促進劑為銅離子。

4.一種包含如權利要求1所述的人成纖維細胞生長因子18的制劑，其特征在于：按照重量計算，包括：5～50ug/劑的所述人成纖維細胞生長因子18、0.1～0.5mg/劑的表面活性劑泊洛沙姆、10～50mg/劑的穩定劑蔗糖、1.0～5.0mg/劑的N-乙酰葡萄糖醛酸反復交替形成的玻璃酸鈉以及400～800ug/劑的抗氧化劑組氨酸。

5.根據權利要求4所述的一種人成纖維細胞生長因子18的制劑，其特征在于：制劑的pH范圍為6.50～8.50。

6.一種如權利要求1所述的人成纖維細胞生長因子18在制備用于治療骨關節炎或關節軟骨損傷制劑中的用途。