[發明專利]一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物及試劑盒

在審

• 申請號: 201910150269.0
• 申請日: 2019-02-28
• 公開（公告）號: CN109735639A
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發明（設計）人: 倪劍鋒;史俊穎;高華山;孫莎莎;童慧珊;劉春燕;楊實
• 申請（專利權）人: 寧波基內生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/22
• 代理公司: 寧波慈恒專利代理事務所(特殊普通合伙) 33249
• 代理人: 劉世勇

本發明公開了一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物及試劑盒，所述三種主要碳青霉烯酶基因為KPC基因、NDM?1基因和OXA?48基因，所述肺炎克雷伯菌基因為phoE基因；所述引物和探針組合物包括分別用于檢測所述KPC基因、所述NDM?1基因、所述OXA?48基因和所述phoE基因的正向引物、反向引物和探針，如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12所示。本發明應用實時熒光定量PCR檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因，與目前常規臨床檢測方法相比檢測周期大大縮短，提高了效率和檢測通量，迎合了檢測需求，而且具有較高的特異性、靈敏度和準確性，同時由于實驗中沒有擴增之后的檢測過程，能夠有效解決實驗中的污染問題。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體涉及一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物及試劑盒。

背景技術

碳青霉稀類耐藥腸桿菌科細菌(carbapenem-resistant enterobacteriaceae，CRE)包括產碳青霉烯酶的克雷伯菌屬和大腸埃希菌，是臨床醫院感染重點監測的病原菌之一。長期以來，碳青霉烯類抗菌藥物是作為治療肺炎克雷伯菌、大腸桿菌和其他腸桿菌科細菌感染時最可靠的抗菌藥物。然而隨著碳青霉烯類抗生素的大范圍使用，肺炎克雷伯菌多重耐藥株不斷出現，不僅容易引起復發性感染，致使治療失敗和增加病死率，而且幾乎沒有新的抗菌藥物能替代，使臨床治療陷入無藥可用的境地，給臨床醫生的決策帶來極大困難。

目前對不同分類的碳青霉烯酶臨床采用不同的檢測方法，如改良 Hodge試驗、雙紙片協同實驗、微量肉湯稀釋法和紙片擴散法等等，這些方法各自存在一定的缺陷，同時還存在假陽性可能，而且這些常規藥敏試驗均以菌培養為基礎，靈敏度較低，檢測周期較長。

發明內容

本發明解決的技術問題之一是提供一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物。

本發明解決的技術問題之二是提供一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的試劑盒。

本發明解決的技術問題之三是提供一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的試劑盒的使用方法。

本發明應用實時熒光定量PCR檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因，與目前常規臨床檢測方法相比檢測周期大大縮短，提高了效率和檢測通量，迎合了檢測需求，而且具有較高的特異性、靈敏度和準確性，同時由于實驗中沒有擴增之后的檢測過程，能夠有效解決實驗中的污染問題。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案如下：

一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物，所述三種主要碳青霉烯酶基因為KPC基因、NDM-1 基因和OXA-48基因，所述肺炎克雷伯菌基因為phoE基因；所述引物和探針組合物包括分別用于檢測所述KPC基因、所述NDM-1基因、所述OXA-48基因和所述phoE基因的正向引物、反向引物和探針；用于檢測所述KPC基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如 SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；用于檢測所述 NDM-1基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；用于檢測所述OXA-48 基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示；用于檢測所述phoE基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示。

優選地，用于檢測所述KPC基因和所述OXA-48基因的正向引物、反向引物和探針組成第一引物探針組合物；用于檢測所述NDM-1 基因和所述phoE基因的正向引物、反向引物和探針組成第二引物探針組合物。