[發明專利]一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物及試劑盒

在審

• 申請號: 201910150269.0
• 申請日: 2019-02-28
• 公開（公告）號: CN109735639A
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發明（設計）人: 倪劍鋒;史俊穎;高華山;孫莎莎;童慧珊;劉春燕;楊實
• 申請（專利權）人: 寧波基內生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/22
• 代理公司: 寧波慈恒專利代理事務所(特殊普通合伙) 33249
• 代理人: 劉世勇

1.一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物，其特征在于，所述三種主要碳青霉烯酶基因為KPC基因、NDM-1基因和OXA-48基因，所述肺炎克雷伯菌基因為phoE基因；所述引物和探針組合物包括分別用于檢測所述KPC基因、所述NDM-1基因、所述OXA-48基因和所述phoE基因的正向引物、反向引物和探針；用于檢測所述KPC基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；用于檢測所述NDM-1基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.4、SEQID NO.5和SEQ ID NO.6所示；用于檢測所述OXA-48基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示；用于檢測所述phoE基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示。

2.如權利要求1所述的一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物，其特征在于，用于檢測所述KPC基因和所述OXA-48基因的正向引物、反向引物和探針組成第一引物探針組合物；用于檢測所述NDM-1基因和所述phoE基因的正向引物、反向引物和探針組成第二引物探針組合物。

3.如權利要求2所述的一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物，其特征在于，用于檢測所述KPC基因的探針的5′端標記報告熒光基團為FAM，3端標記淬滅熒光基團TAMRA；用于檢測所述NDM-1基因的探針的5端標記報告熒光基團為ROX，3端標記淬滅熒光基團BHQ2；用于檢測所述OXA-48基因的探針的5′端標記報告熒光基團為ROX，3′端標記淬滅熒光基團BHQ2；用于檢測所述phoE基因的探針的5′端標記報告熒光基團為FAM，3′端標記淬滅熒光基團BHQ1。

4.如權利要求3所述的一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物，其特征在于，所述第一引物探針組合物和所述第二引物探針組合物分別包括用于檢測內標int基因的正向引物、反向引物和探針；用于檢測所述內標int基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示。

5.如權利要求4所述的一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的引物和探針組合物，其特征在于，用于檢測所述內標int基因的探針的5’端標記熒光基團為JOE，3’端標記淬滅基團TAMRA。

6.一種用于檢測肺炎克雷伯菌及三種主要碳青霉烯酶基因的試劑盒，其特征在于，所述三種主要碳青霉烯酶基因為KPC基因、NDM-1基因和OXA-48基因，所述肺炎克雷伯菌基因為phoE基因；所述試劑盒包括核酸抽提液、PCR反應酶系、內標、陰性對照品、陽性對照品、第一引物探針混合液和第二引物探針混合液；所述第一引物探針混合液包括第一引物探針組合物，所述第一引物探針組合物由用于檢測KPC基因和OXA-48基因的正向引物、反向引物和探針組成；所述第二引物探針混合液包括第二引物探針組合物，所述第二引物探針組合物由用于檢測NDM-1基因和phoE基因的正向引物、反向引物和探針組成；用于檢測所述KPC基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；用于檢測所述NDM-1基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.4、SEQID NO.5和SEQ ID NO.6所示；用于檢測所述OXA-48基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示；用于檢測所述phoE基因的正向引物、反向引物和探針的序列分別如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示。