[發明專利]一種UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法

在審

• 申請號: 201910149384.6
• 申請日: 2019-02-28
• 公開（公告）號: CN109856306A
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發明（設計）人: 畢曉黎;鐘鳴;劉布鳴;陳昭;賴茂祥;胥愛麗;李養學;柴玲;邱宏聰
• 申請（專利權）人: 廣東省第二中醫院（廣東省中醫藥工程技術研究院）;廣西壯族自治區中醫藥研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 東莞市興邦知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 44389
• 代理人: 梁首強;馮思婷

本發明公開了一種UHPLC?MS?MS測定水翁花中熊果酸的方法，其包括以下步驟：取水翁花藥材粉末，加入甲醇，超聲處理，加甲醇補足減失重量，過濾，取續濾液加甲醇定容，即得供試品溶液；取熊果酸對照品，加甲醇溶解并定容，即得對照品溶液；取對照品溶液制成不同濃度的熊果酸標準溶液，注入高效液相色譜?質譜聯用儀中分析，以進樣濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得到標準曲線，將供試品溶液注入高效液相色譜?質譜聯用儀中，測得供試品溶液的峰面積，計算得出熊果酸的含量。本發明采用UHPLC檢測方法，操作簡單快速，穩定可靠，靈敏度和重復性良好，具有較高的精密度，大大縮短了檢測時間，便于對水翁花中熊果酸進行定量檢測。

技術領域

本發明涉及化學檢測領域，具體涉及一種UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法。

背景技術

水翁花為兩廣民間習用藥材，主要有清熱、鎮痛、抗炎等功效。目前為止，水翁花的藥材標準收載于《廣東省藥材標準》(第一冊)，現行版《中國藥典》并未收載。同時，相關標準僅涉及水翁花的形狀、鑒別等項目，缺乏對水翁花中熊果酸快速、高效、可量化的質量評價、分析標準。因此，建立一種利用UHPLC-MS-MS對水翁花中熊果酸的測定方法，對于促進熊果酸的開發利用有重要作用。

發明內容

為了克服上述技術問題，本發明公開了一種UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法。

本發明為實現上述目的所采用的技術方案是：

一種UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法，其包括以下步驟：

步驟1，供試品溶液的制備：取水翁花藥材粉末，加入甲醇，超聲處理，加甲醇補足減失重量，過濾，取續濾液加甲醇定容，即得供試品溶液；

步驟2，對照品溶液的制備：取熊果酸對照品，加甲醇溶解并定容，即得對照品溶液；

步驟3，含量的測定：取對照品溶液制成不同濃度的熊果酸標準溶液，注入高效液相色譜-質譜聯用儀中分析，以熊果酸標準溶液的進樣濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得到標準曲線，將供試品溶液注入高效液相色譜-質譜聯用儀中，測得供試品溶液的峰面積，計算得出熊果酸的含量。

上述的UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法，其中在步驟3中，高效液相色譜-質譜聯用儀的色譜條件：采用Phenomenex-C18柱為色譜柱，色譜柱規格為2.0×50mm、5μm，以乙腈為流動相A，以水為流動相B，梯度洗脫，流速為700μL/min，柱溫為25℃，進樣量為10μL。

上述的UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法，其中梯度洗脫的條件：0-1min，5-5％A；1.0-1.5min，5-95％A；1.5-2.5min，95-95％A；2.5-3.0min，95-5％A。

上述的UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法，其中在步驟3中，高效液相色譜-質譜聯用儀的質譜條件：ESI離子源，采用質譜正、負離子模式，汽化室溫度為350℃，鞘氣壓力為30psi，輔氣壓力為10psi，離子傳輸管溫度為300℃；水翁花檢測采用SIM模式，質荷比為455.5。

上述的UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法，其中正離子模式噴霧電壓為3500V，負離子模式噴霧電壓為3000V。

上述的UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法，其中在步驟1中，水翁花藥材粉末與甲醇的比例為0.5g水翁花藥材粉末：25mL甲醇。

上述的UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法，其中在步驟1中，超聲處理30min，采用0.22μm微孔濾膜過濾。

上述的UHPLC-MS-MS測定水翁花中熊果酸的方法，其中在步驟3中，取適量對照品溶液，分別加甲醇稀釋并定容，制得濃度分別為10、50、100、200、500、1000ng/mL的熊果酸標準溶液。