[發明專利]水溶性化妝品中耐熱大腸菌群定性標準樣品及制備方法

在審

• 申請號: 201910149276.9
• 申請日: 2019-02-28
• 公開（公告）號: CN109762870A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 盧行安;陳瀟;凌莉;馬文麗;林立民;潘裕紅;石雨婷;趙紅陽
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10;C12Q1/24
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 于忠晶

本發明屬于化妝品微生物學檢測方面的質量控制領域，特別涉及一種水溶性化妝品中耐熱大腸菌群定性標準樣品及其制備方法。水溶性化妝品中耐熱大腸菌群定性標準樣品包括目標菌群和背景菌群，所述目標菌群是大腸埃希氏菌、陰溝腸桿菌、肺炎克雷伯菌，所述背景菌群由蠟樣芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌組成。本發明樣品中菌群的組成及含量與實際樣品一致；標準樣品與實際樣品基體成分一致；均勻性、穩定性符合標準樣品要求，可以最大程度保證標準樣品的穩定性；樣品的制備方法、工藝簡單，成功率高。

技術領域

本發明屬于化妝品微生物學檢測方面的質量控制領域，特別涉及一種水溶性化妝品中耐熱大腸菌群定性標準樣品及其制備方法。

背景技術

化妝品是許多人日常生活中的個人護理產品，其本身的作用及安全性直接關系到使用者的身體健康安全。化妝品中微生物直接反映著化妝品被細菌污染的程度，以及生產單位所用的原料、工具設備、工藝流程、操作者的衛生狀況，是對化妝品進行衛生學評價的綜合依據。水溶性化妝品微生物學檢驗領域非常特殊。目前，國內外尚未有機構制備水溶性化妝品微生物學標準樣品和大規模生產的先例，仍屬空白領域。目前國內已有的僅是標準菌株或僅含有純菌的適用于食品領域的標準樣品，與實際的樣品不一致，無法滿足日常實驗室質量控制等需要。

大腸菌群是指在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。如果制備的耐熱大腸菌群樣品中，目標菌群易發生變化(繁殖和死亡等)，就會導致樣品的保存期短，樣品的均勻性和穩定性差；背景菌和目標菌含量的高低也是制備該標準樣品的重要考慮因素，通常實際樣品中微生物含量較低，因此所制備的標準樣品中背景菌和目標菌含量應與實際樣品保持一致。因此，綜合考慮耐熱大腸菌群定性的生化特性，選取性質相對穩定的標準菌株作為目標菌群對保證樣品的均勻性和穩定性十分重要，并且樣品的均勻性和穩定性與凍干的菌種、凍干的工藝條件、凍干保護劑的使用、再水化的介質等均有密切的關系。

水溶性化妝品中如果檢出耐熱大腸菌群，表明化妝品已被糞便污染，且有可能存在其他腸道致病菌或寄生蟲等病原體的危險，將會有危害人皮膚的危險。因此，制備均勻性與穩定性俱佳的耐熱大腸菌群樣品，可以避免耐熱大腸菌群檢驗的隨意性和不確定性，真實地反映檢測實驗室的能力。這對提高實驗室質量控制水平，保障水溶性化妝品的質量具有特殊重要的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種與實際樣品一致的標準樣品，用于化妝品檢測過程中質量控制、人員培訓、方法驗證、培養基或試劑盒性能評價等用途，均勻性、穩定性符合標準樣品的要求，本發明的另一個目的是提供該樣品的制備方法，工藝簡單，成功率高。

本發明為實現上述目的所采用的技術方案是：水溶性化妝品中耐熱大腸菌群定性標準樣品，其特征是：包括目標菌群與背景菌群，所述目標菌群由大腸埃希氏菌、陰溝腸桿菌、肺炎克雷伯菌組成，所述背景菌群由蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)組成。

所述樣品基體為化妝水，化妝水體積分數為0.5％；保護劑以海藻糖和無菌水組成，其中海藻糖體積分數為10％。

所述樣品中目標菌群的目標濃度為10²～10³CFU/mL，背景菌群的目標濃度為10³CFU/mL。

水溶性化妝品中耐熱大腸菌群定性標準樣品的制備方法，其特征是：包括凍干保護劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩定性試驗、樣品定值四個步驟，其中樣品凍干過程為：菌株復蘇傳代—增菌—菌懸液配制—凍干—包裝—儲存，具體過程為：

(1)菌株復蘇傳代

將標準菌株接種到營養瓊脂斜面培養基中，在36±1℃下使其復蘇和生長，并對復蘇的菌株進行鑒定；

(2)增菌