[發(fā)明專利]水溶性化妝品中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品及制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910149127.2
• 申請(qǐng)日: 2019-02-28
• 公開（公告）號(hào): CN109797191A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧行安;崔生輝;趙紅陽(yáng);王偉;孫英健;宋嬌嬌;楊光;王秀君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/14
• 分類號(hào): C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12N1/20;C12R1/085;C12R1/445;C12R1/22;C12R1/01
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 于忠晶

本發(fā)明屬于化妝品微生物學(xué)檢測(cè)方面的質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及一種水溶性化妝品中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品及其制備方法。水溶性化妝品中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品目標(biāo)菌群由蠟樣芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌組成。本發(fā)明樣品中菌群的組成及含量與實(shí)際樣品一致；標(biāo)準(zhǔn)樣品與實(shí)際樣品基體成分一致；均勻性、穩(wěn)定性符合標(biāo)準(zhǔn)樣品要求，可以最大程度保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的穩(wěn)定性；樣品的制備方法、工藝簡(jiǎn)單，成功率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化妝品微生物學(xué)檢測(cè)方面的質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及一種水溶性化妝品中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品及其制備方法。

背景技術(shù)

化妝品是許多人日常生活中的個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品，其本身的作用及安全性直接關(guān)系到使用者的身體健康安全。化妝品中微生物直接反映著化妝品被細(xì)菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、操作者的衛(wèi)生狀況，是對(duì)化妝品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。水溶性化妝品微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域非常特殊。目前，國(guó)內(nèi)外尚未有機(jī)構(gòu)制備水溶性化妝品微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品和大規(guī)模生產(chǎn)的先例，仍屬空白領(lǐng)域。目前國(guó)內(nèi)已有的僅是標(biāo)準(zhǔn)菌株或僅含有純菌的適用于食品領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)樣品，與實(shí)際的樣品不一致，無法滿足日常實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制等需要。

細(xì)菌總數(shù)系指1g或1mL化妝品中所含的活菌數(shù)量。如果制備的菌落總數(shù)樣品中，目標(biāo)菌群易發(fā)生變化(繁殖和死亡等)，就會(huì)導(dǎo)致樣品的保存期短，樣品的均勻性和穩(wěn)定性差；背景菌和目標(biāo)菌含量的高低也是制備該標(biāo)準(zhǔn)樣品的重要考慮因素，通常實(shí)際樣品中微生物含量較低，因此所制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品中背景菌和目標(biāo)菌含量應(yīng)與實(shí)際樣品保持一致。因此，綜合考慮細(xì)菌的生化特性，選取性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株作為目標(biāo)菌群對(duì)保證樣品的均勻性和穩(wěn)定性十分重要，并且樣品的均勻性和穩(wěn)定性與凍干的菌種、凍干的工藝條件、凍干保護(hù)劑的使用、再水化的介質(zhì)等均有密切的關(guān)系。

水溶性化妝品中菌落總數(shù)指標(biāo)，直接反映著化妝品被細(xì)菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、操作者的衛(wèi)生狀況，是對(duì)化妝品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。如果微生物超過一定限量，就加大了致病菌的存在風(fēng)險(xiǎn)，并最終傷害皮膚危險(xiǎn)的發(fā)生。因此，制備均勻性與穩(wěn)定性俱佳的菌落總數(shù)樣品，可以避免菌落總數(shù)檢驗(yàn)的隨意性和不確定性，真實(shí)地反映檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的能力。這對(duì)提高實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制水平，保障水溶性化妝品的質(zhì)量具有特殊重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種與實(shí)際樣品一致的標(biāo)準(zhǔn)樣品，用于化妝品檢測(cè)過程中質(zhì)量控制、人員培訓(xùn)、方法驗(yàn)證、培養(yǎng)基或試劑盒性能評(píng)價(jià)等用途，均勻性、穩(wěn)定性符合標(biāo)準(zhǔn)樣品的要求，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該樣品的制備方法，工藝簡(jiǎn)單，成功率高。

本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是：水溶性化妝品中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品，其特征是：目標(biāo)菌群由蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapnenmoniae)、陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)組成。

所述樣品基體為化妝水，化妝水體積分?jǐn)?shù)為0.5％；保護(hù)劑以海藻糖和無菌水組成，其中海藻糖體積分?jǐn)?shù)為10％。

所述樣品中目標(biāo)菌群的目標(biāo)濃度為10²～10³CFU/mL。

水溶性化妝品中菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備方法，其特征是：包括凍干保護(hù)劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)、樣品定值四個(gè)步驟，其中樣品凍干過程為：菌株復(fù)蘇傳代—增菌—菌懸液配制—凍干—包裝—儲(chǔ)存，具體過程為：

(1)菌株復(fù)蘇傳代

將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在36±1℃下使其復(fù)蘇和生長(zhǎng)，并對(duì)復(fù)蘇的菌株進(jìn)行鑒定；

(2)增菌

目標(biāo)菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護(hù)劑中制成相應(yīng)單一菌種的菌液；

(3)菌懸液配制