[發(fā)明專利]枯草芽孢桿菌適用性試驗(yàn)菌株及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910149086.7
• 申請(qǐng)日: 2019-02-28
• 公開（公告）號(hào): CN109868238A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊潔;王倩;趙紅陽;謝艷;王玨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江寶錄檢測(cè)技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 于忠晶

本發(fā)明屬于藥品微生物學(xué)檢測(cè)方面的質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及一種枯草芽孢桿菌適用性試驗(yàn)菌株及其制備方法。枯草芽孢桿菌適用性試驗(yàn)菌株僅包含一定量的枯草芽孢桿菌。本發(fā)明均勻性、穩(wěn)定性符合適用性試驗(yàn)菌株要求，菌株所含菌數(shù)在適用性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)要求范圍內(nèi)，最大程度滿足藥品微生物檢測(cè)過程中適用性試驗(yàn)、促生長(zhǎng)試驗(yàn)等需要，樣品的制備方法，工藝簡(jiǎn)單，成功率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物學(xué)檢測(cè)方面的質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及一種枯草芽孢桿菌適用性試驗(yàn)菌株及其制備方法。

背景技術(shù)

介于藥品的特殊性，藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的非常特殊，要求每次檢測(cè)之前培養(yǎng)基等供試品均需進(jìn)行適用性檢查，對(duì)試驗(yàn)用菌株有規(guī)定的濃度范圍要求。目前已有的純菌株大多數(shù)未進(jìn)行定量，僅可供定性使用，僅有少數(shù)的定量菌株。對(duì)于該類定量菌株，均勻性和穩(wěn)定性尤為重要，現(xiàn)有的定量菌株存在穩(wěn)定性差，運(yùn)輸條件要求較高等問題。

枯草芽孢桿菌屬于芽孢桿菌屬，是一種革蘭氏陽性需氧菌，能產(chǎn)生橢圓或圓柱形芽孢，它們對(duì)高溫、高熱、電輻射、紫外線及某些化學(xué)藥品具有很強(qiáng)的抗逆性。如果制備的枯草芽孢桿菌樣品中，枯草芽孢桿菌易發(fā)生變化(繁殖和死亡等)，就會(huì)導(dǎo)致樣品的保存期短，樣品的均勻性和穩(wěn)定性差。因此，綜合考慮細(xì)菌的生化特性，選取性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定的枯草芽孢桿菌對(duì)保證樣品的均勻性和穩(wěn)定性十分重要。枯草芽孢桿菌樣品制備的工藝技術(shù)要求比較高，并且樣品的均勻性和穩(wěn)定性與凍干的菌種、凍干的工藝條件、凍干保護(hù)劑的使用、再水化的介質(zhì)等均有密切的關(guān)系。

藥品中枯草芽孢桿菌指標(biāo)，直接影響藥品的衛(wèi)生質(zhì)量與安全。因此，制備均勻性與穩(wěn)定性俱佳的枯草芽孢桿菌適用性試驗(yàn)菌株，可以避免致病風(fēng)險(xiǎn)。如果藥品中存在枯草芽孢桿菌，極易對(duì)患者造成感染等，直接威脅患者的生命。枯草芽孢桿菌檢驗(yàn)的隨意性和不確定性，真實(shí)地反映檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的能力，這對(duì)提高實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制水平，保障藥品安全，甚至打破國(guó)際貿(mào)易壁壘、提高我國(guó)藥品國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力都具有特殊重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種滿足藥品微生物檢測(cè)過程中適用性試驗(yàn)要求的定量枯草芽孢桿菌適用性試驗(yàn)菌株；同時(shí)，克服枯草芽孢桿菌適用性試驗(yàn)菌株中總的活的細(xì)菌數(shù)目在運(yùn)輸、儲(chǔ)存和測(cè)試等過程中菌落數(shù)都可發(fā)生變化的問題，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該適用性試驗(yàn)菌株的制備方法，工藝簡(jiǎn)單，成功率高。

本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是：枯草芽孢桿菌適用性試驗(yàn)菌株，其特征是：僅包含一種目標(biāo)菌：枯草芽孢桿菌，目標(biāo)菌的目標(biāo)濃度為500～2000CFU/支，每支裝有0.2g的凍干粉。

所述樣品屬藥品檢查中適用性試驗(yàn)用菌株，應(yīng)用于藥品微生物檢測(cè)過程中適用性試驗(yàn)。

所述適用性試驗(yàn)菌株以海藻糖、明膠和無菌水為基質(zhì)，其中海藻糖體積分?jǐn)?shù)為10％、明膠體積分?jǐn)?shù)為1％。

枯草芽孢桿菌適用性試驗(yàn)菌株的制備方法，其特征是：包括樣品添加菌株的配制、凍干保護(hù)劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩(wěn)定性試驗(yàn)、樣品定值五個(gè)步驟，其中樣品凍干過程為：菌株復(fù)蘇傳代—增菌—菌液分裝—菌懸液配制—凍干和包裝—儲(chǔ)存，具體過程為：

(1)菌株復(fù)蘇傳代

將標(biāo)準(zhǔn)菌株接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基中，在36±1℃下使其復(fù)蘇和生長(zhǎng)，并對(duì)復(fù)蘇的菌株進(jìn)行鑒定；

(2)增菌

目標(biāo)菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期末，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護(hù)劑中制成菌液；

(3)菌液分裝

將上一過程得到的菌液與凍干保護(hù)劑混合，配制100mL菌液，將此菌液置于磁力攪拌器上不斷攪拌下平均分裝到菌液儲(chǔ)存瓶中，每瓶5mL，共20瓶，置于液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

(4)菌懸液配制