[發明專利]枯草芽孢桿菌適用性試驗菌株及其制備方法

在審

• 申請號: 201910149086.7
• 申請日: 2019-02-28
• 公開（公告）號: CN109868238A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 楊潔;王倩;趙紅陽;謝艷;王玨
• 申請（專利權）人: 浙江寶錄檢測技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 大連博晟專利代理事務所(特殊普通合伙) 21236
• 代理人: 于忠晶

1.枯草芽孢桿菌適用性試驗菌株，其特征是：僅包含一種目標菌：枯草芽孢桿菌，目標菌的目標濃度500～2000CFU/支，每支裝有0.2g的凍干粉。

2.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌適用性試驗菌株，其特征是：所述樣品屬藥品檢查中適用性試驗用菌株，應用于藥品微生物檢測過程中適用性試驗。

3.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌適用性試驗菌株，其特征是：所述適用性試驗菌株以海藻糖、明膠和無菌水為基質，其中海藻糖體積分數為10％、明膠體積分數為1%。

4.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌適用性試驗菌株的制備方法，其特征是：包括樣品添加菌株的配制、凍干保護劑的配制、樣品凍干、樣品的均勻性和穩定性試驗、樣品定值五個步驟，其中樣品凍干過程為：菌株復蘇傳代—增菌—菌液分裝—菌懸液配制—凍干和包裝—儲存，具體過程為：

（1）菌株復蘇傳代

將標準菌株接種到營養瓊脂斜面培養基中，在36±1℃下使其復蘇和生長，并對復蘇的菌株進行鑒定；

（2）增菌

目標菌培養至對數生長期末，從斜面刮取菌落，加到10mL的凍干保護劑中制成菌液；

（3）菌液分裝

將上一過程得到的菌液與凍干保護劑混合，配制100mL菌液，將此菌液置于磁力攪拌器上不斷攪拌下平均分裝到菌液儲存瓶中，每瓶5mL，共20瓶，置于液氮中保存備用；

（4）菌懸液配制

按目標菌的目標濃度500～2000 CFU/支，取適量上述5mL菌液與1500mL凍干保護劑混合，置于磁力攪拌器上不斷攪拌下分裝到樣品瓶中，0.3mL/瓶，加上瓶塞，但要留有空隙，不要蓋實；

（5）凍干和包裝

將裝有菌懸液的樣品瓶開蓋放入凍干機中，冷凍干燥40～50h，當樣品冷凍干燥結束后，直接進行箱內加塞，關閉機器，樣品瓶中樣品為真空狀態；

（6）儲存

將樣品放置在-18℃條件下避光保存，從全部樣品中隨機挑選樣品發放給實驗室或進行均勻性和穩定性試驗。

5.根據權利要求4所述的枯草芽孢桿菌適用性試驗菌株的制備方法，其特征是：所述凍干保護劑為含有海藻糖和明膠的無菌水，其中體積分數分別為：海藻糖10%、明膠1%；一次性配制相同濃度的菌液，可重復制備多批次相同量值范圍的適用性試驗菌株。

6.根據權利要求4所述的枯草芽孢桿菌適用性試驗菌株的制備方法，其特征是：所述樣品的均勻性和穩定性試驗按照均勻性和穩定性試驗參照GB/T 15000.3-2008《標準樣品工作導則（3）標準樣品定值的一般原則和統計方法》進行。