[發明專利]一種同時檢測四種出血熱病毒的納米金生物傳感器及檢測方法

在審

• 申請號: 201910148421.1
• 申請日: 2019-02-28
• 公開（公告）號: CN110042173A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 曾令文;趙錦
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6825;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明公開了一種同時檢測四種出血熱病毒的納米金生物傳感器及檢測方法。所述傳感器包括基底、樣品墊、吸收墊、硝化纖維薄膜和結合墊，所述樣品墊和吸收墊固定于所述基底的兩端，所述硝化纖維薄膜固定于所述基底的中部；所述吸收墊和所述硝化纖維薄膜之間有2?3mm的重疊，所述硝化纖維薄膜和所述結合墊之間有2?3mm的重疊，所述結合墊和所述樣品墊之間有2?3mm的重疊；所述結合墊上具有金納米粒子DNA探針。本發明具有靈敏度高、特異性高、檢測時間短，可在60分鐘內完成檢測、檢測成本低的優點。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種同時檢測四種出血熱病毒的納米金生物傳感器及檢測方法。

背景技術

血熱病毒多樣，易傳染且危害巨大，2014年爆發的埃博拉病毒已致死7000多人，綜合致死率達50％以上。同年廣東省爆發的登革病毒感染人數超40000人。國內外針對出血熱病毒檢測主要有分離培養、電鏡觀察、免疫熒光以及RT-PCR等方法，以往的診斷方法存在過程復雜、重復性差、靈敏度不夠以及成本高等缺點。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明旨在提供一種同時檢測四種出血熱病毒的納米金生物傳感器及檢測方法，利用磁性納米分離、切刻酶輔助的等溫鏈置換擴增及納米金試紙條技術，可簡便快速、靈敏準確地同時檢測四種出血熱病毒，提高對病毒的診斷防控能力。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種同時檢測四種出血熱病毒的納米金生物傳感器，包括基底、樣品墊、吸收墊、硝化纖維薄膜和結合墊，所述樣品墊和吸收墊固定于所述基底的兩端，所述硝化纖維薄膜固定于所述基底的中部；所述吸收墊和所述硝化纖維薄膜之間有2-3mm的重疊，所述硝化纖維薄膜和所述結合墊之間有2-3mm的重疊，所述結合墊和所述樣品墊之間有2-3mm的重疊；所述結合墊上具有金納米粒子DNA探針；所述金納米粒子DNA探針包括：

漢坦病毒金納米粒子DNA探針：S-n-GGACAACTTCCACTTAGGGGA；

基孔肯雅熱病毒金納米粒子DNA探針：S-n-CTACAGCCCCATGGTACTGG；

登革熱病毒金納米粒子DNA探針：S-n-GCTGAAACGCGAGAGAAACC；

埃博拉病毒金納米粒子DNA探針：S-n-TCCAACAGCTTGGCAATCAGT。

本發明還提供一種同時檢測四種出血熱病毒的納米金生物傳感器的檢測方法，包括如下步驟：

S1、病原體裂解后，RNA提取采用磁性納米顆粒富集核酸，經過洗脫后進一步進行反轉錄；

S2、反轉錄產物再次使用磁性納米顆粒進行篩選，最終洗脫下來的核酸加入到等溫鏈置換擴增反應體系中并置入37℃水浴鍋中，經過30min的反應后，擴增產物作為檢測樣品滴加到樣品墊上，5min后用肉眼觀察結果。

本發明的有益效果在于：

1、本發明靈敏度高，可達0.01pM；

2、本發明特異性高，可區分單堿基；

3、本發明檢測時間短，可在60分鐘內完成檢測；

4、檢測成本低，結果肉眼可見，方便快捷。

附圖說明

圖1為本發明制備的一種同時檢測四種出血熱病毒的納米金生物傳感器的結構示意圖；

圖2為SDA擴增產物的凝膠電泳圖；

圖3為本發明制備的一種同時檢測四種出血熱病毒的納米金生物傳感器的特異性分析結果示意圖；

圖4為本發明制備的一種同時檢測四種出血熱病毒的納米金生物傳感器的靈敏度分析結果示意圖。