[發(fā)明專利]一種基于溫敏水凝膠材料的非胰酶消化收獲細胞培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910147657.3
• 申請日: 2019-02-27
• 公開（公告）號: CN110055208B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡巧玲;董曉飛;王征科;喬豐慧;姜質(zhì)琦;姚遠
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州妥愛沐醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C08J3/075;C08F251/00;C08F220/54;C08L51/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 萬尾甜;韓介梅

1.一種基于溫敏水凝膠材料的非胰酶消化收獲細胞培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）聚N-異丙基丙烯酰胺改性殼聚糖大分子的制備：按重量計，將1-20份殼聚糖、0.1-2份酸、0.01-8份引發(fā)劑、1-20份N-異丙基丙烯酰胺單體、50-98份去離子水加入反應(yīng)器中，攪拌溶解均勻后，在60^oC反應(yīng)1-12小時，然后使用去離子水將反應(yīng)產(chǎn)物透析至中性，真空凍干得到聚N-異丙基丙烯酰胺改性殼聚糖粉末；所述的酸為鹽酸；

2）聚N-異丙基丙烯酰胺改性殼聚糖水溶液的制備：將1-20份1）中的聚N-異丙基丙烯酰胺改性殼聚糖粉末加入80-99份PBS溶液中，室溫下攪拌溶解均勻后得到聚N-異丙基丙烯酰胺改性殼聚糖溶液，簡稱水凝膠溶液；

3）非胰酶消化收獲細胞培養(yǎng)：將細胞懸液和步驟2）制備的水凝膠溶液在較低溫度下混合均勻后加入培養(yǎng)皿中，然后置于37^oC細胞培養(yǎng)箱中，混合液迅速形成凝膠后加入37^oC的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，經(jīng)培養(yǎng)后將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到室溫下降低培養(yǎng)溫度，細胞被釋放后離心分離；所述的較低溫度為10-28^oC；

或者，將步驟2）制備的水凝膠溶液在較低溫度下涂在培養(yǎng)皿底面，然后置于37^oC細胞培養(yǎng)箱中，待形成凝膠后將37^oC的細胞懸液和培養(yǎng)基混合溶液加入培養(yǎng)皿中進行培養(yǎng)，經(jīng)培養(yǎng)后將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到室溫下降低培養(yǎng)溫度，細胞被釋放后離心分離；所述的較低溫度為10-28^oC。

2.如權(quán)利要求1所述的一種基于溫敏水凝膠材料的非胰酶消化收獲細胞培養(yǎng)方法，其特征在于：所述的殼聚糖分子量為3萬-150萬，脫乙酰度為50%-95%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于溫敏水凝膠材料的非胰酶消化收獲細胞培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的引發(fā)劑為過硫酸銨或過硫酸鉀。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于溫敏水凝膠材料的非胰酶消化收獲細胞培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的細胞為貼壁細胞。