[發(fā)明專利]一種南瓜籽蛋白水解物及其制備方法

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• 申請日: 2019-02-27
• 公開（公告）號: CN109880869A
• 公開（公告）日: 2019-06-14
• 發(fā)明（設計）人: 何海艷;楊愛萍;蔣彩云;張睿;崔逸
• 申請（專利權）人: 江蘇經貿職業(yè)技術學院
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 上海統(tǒng)攝知識產權代理事務所(普通合伙) 31303
• 代理人: 辛自豪

1.一種南瓜籽蛋白水解物的制備方法，其特征是：包括下述步驟：

步驟A，采用酶解法提取水解南瓜籽蛋白；

步驟B，將步驟A得到的蛋白水解物置于安有5-10kDa超濾膜的超濾裝置中進行超濾，取其截留分子量；依次采用安有3-5kDa的超濾膜、1-3kDa的超濾膜和小于1kDa的超濾膜的超濾裝置對剩余的水解物進行超濾，取其截留分子量，共獲得四組不同的分子量肽段，冷凍干燥。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種南瓜籽蛋白水解物的制備方法，其特征在于，所述步驟B具體為：將步驟A得到的蛋白水解物置于安有5-10kDa超濾膜的超濾裝置中超濾7-8h，取其截留分子量；依次采用安有3-5kDa的超濾膜、1-3kDa的超濾膜和小于1kDa的超濾膜的超濾裝置對剩余的水解物進行超濾，取其截留分子量肽段，共獲得四組不同的分子量肽段，冷凍干燥，每次超濾的時間為7-8h。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種南瓜籽蛋白水解物的制備方法，其特征在于，所述采用酶解法提取水解南瓜籽蛋白是指使用堿性蛋白酶或中性蛋白酶對南瓜籽蛋白進行水解。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種南瓜籽蛋白水解物的制備方法，其特征在于，所述步驟A包括下述步驟：

步驟一，南瓜籽粕粉的制備；

將南瓜籽在80-90℃下干燥1-3h至水分恒重，然后進行粉碎，索氏抽提進行除油，風干，最后過60-80目篩，得到南瓜籽粕粉；

步驟二，南瓜籽蛋白的制備；

將步驟一得到的粉碎過篩后的南瓜籽粕粉分散于蒸餾水中，調節(jié)分散液pH值至8.5-9.5并保持不變，將分散液置于40-50℃的水浴鍋中攪拌1.5-2.5h，室溫下靜置1.5-2.5小時；以1500-2500r/min的轉速離心10-40min，得到下層沉淀蛋白質；將下層沉淀蛋白質取出，冷凍干燥即得南瓜籽蛋白；其中蒸餾水的體積為南瓜籽粕體積的8-12倍；

步驟三，南瓜籽蛋白堿性蛋白酶水解物的制備；

取定量的步驟二得到的南瓜籽蛋白，溶解于蒸餾水，將溶解后的溶液置于攪拌器中，加入質量為南瓜籽蛋白的添加量的3-5％的堿性蛋白酶，調節(jié)溶液pH值至7.5-8.5并保持不變，水解反應3-5h；待水解反應結束之后再將升溫至90-100℃，反應10-20min使其中的酶失去活性；然后對溶液進行冷卻，冷卻后以7000-9000r/min的轉速離心20-30min，取其上清液，冷凍干燥。

5.根據(jù)權利要求4所述的一種南瓜籽蛋白水解物的制備方法，其特征在于，所述步驟一具體為：將南瓜籽在85℃條件下干燥2h至水分恒重，然后進行粉碎，索氏抽提除油至抽提劑清亮，玻璃棒檢測無油，風干，過80目篩，得到南瓜籽粕粉；

所述步驟二具體為：將所述步驟一得到的粉碎過篩后的南瓜籽粕粉分散于體積為南瓜籽粕粉的10倍的蒸餾水中，調節(jié)分散液pH值為9并保持不變，將分散液置于45℃水浴鍋中攪拌2h，室溫下靜置2小時；以2000r/min的轉速離心30min，得到下層沉淀蛋白質；將下層沉淀蛋白質取出，冷凍干燥。

6.根據(jù)權利要求4所述的一種南瓜籽蛋白水解物的制備方法，其特征在于，所述步驟三具體為：取定量的所述步驟二得到的南瓜籽蛋白，溶解于蒸餾水；將溶解后的溶液置于攪拌器中，加入質量為南瓜籽蛋白添加量的4％的堿性蛋白酶，然后調節(jié)溶液pH值為8.0并保持不變，水解反應4h；待水解反應結束之后再將溫度調節(jié)至95℃，反應15min使其中的酶失去活性；然后對溶液進行冷卻，冷卻后以8000r/min的轉速離心25min，取其上清液，冷凍干燥。

7.采用如權利要求1-6中任一項所述的南瓜籽蛋白水解物的制備方法制得的南瓜籽蛋白水解物，其特征是：所述南瓜籽蛋白水解物的分子量小于3kDa。

8.根據(jù)權利要求7所述的南瓜籽蛋白水解物，其特征在于，所述南瓜籽蛋白水解物的分子量小于1kDa。

9.根據(jù)權利要求8所述的南瓜籽蛋白水解物，其特征在于，所述南瓜籽蛋白水解物的組分主要為丙氨酸-谷氨酸、丙氨酸-脯氨酸-丙氨酸、組氨酸-丙氨酸-脯氨酸-丙氨酸-氫氧根、氨基-2-丁烯-丙氨酸-脯氨酸-丙氨酸-組氨酸、氨基-2-丁烯-丙氨酸-脯氨酸-丙氨酸-氫氧根和絲氨酸-丙氨酸-脯氨酸-丙氨酸中的一種或多種。