[發(fā)明專利]用于生成對(duì)抗細(xì)胞表面抗原的結(jié)合劑的方法和組合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910143060.1
• 申請(qǐng)日: 2014-09-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110058023B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳艷;S·沙瑪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: X博迪公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 陳文平;袁元

1.一種識(shí)別特異性地結(jié)合細(xì)胞表面抗原的結(jié)合多肽的方法，該方法包括：

(a).將第一細(xì)胞類型與結(jié)合多肽的多樣的無(wú)細(xì)胞核酸展示文庫(kù)接觸，由此形成結(jié)合多肽/抗原復(fù)合物的群體，其中所述的第一細(xì)胞類型在其外部表面上展示所述的細(xì)胞表面抗原；

(b).將所述的第一細(xì)胞類型與表面活性劑接觸，從而所述的結(jié)合多肽/抗原復(fù)合物的群體溶解；以及

(c).分離所述的溶解的結(jié)合多肽/抗原復(fù)合物的群體，由此分離特異性地結(jié)合在所述的第一細(xì)胞類型的外部表面上的細(xì)胞表面抗原的至少一種文庫(kù)的成員，由此識(shí)別特異性地結(jié)合所述的細(xì)胞表面抗原的結(jié)合多肽，

其中所述的細(xì)胞表面抗原選自胰高血糖素受體(GCGR),CXCR1,CXCR2,CXCR3,CXCR4,CXCR6,CCR1,CCR2,CCR3,CCR4,CCR5,CCR6,CCR8,CFTR,CIC-1,CIC-2,CIC-4,CIC-5,CIC-7,CIC-Ka,CIC-Kb,Bestrophins,TMEM16A,GABA受體,甘氨酸受體,ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,NAV1.1,NAV1.2,NAV1.3,NAV1.4,NAV1.5,NAV1.6,NAV1.7,NAV1.8,NAV1.9,鞘氨醇-l-磷酸受體和NMDA通道。

2.權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括：

(d).將第二細(xì)胞類型與所述結(jié)合多肽的多樣的無(wú)細(xì)胞核酸展示文庫(kù)接觸，并由所述的文庫(kù)分離至少一種特異性地結(jié)合所述的第二細(xì)胞類型的文庫(kù)的成員，其中所述的第二細(xì)胞類型未展示在其外部表面上的細(xì)胞表面抗原；以及

(e).選擇特異性地結(jié)合所述的第一細(xì)胞類型、但不結(jié)合所述的第二細(xì)胞類型的文庫(kù)的成員。

3.權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(a)中的接觸發(fā)生在允許所述的細(xì)胞表面抗原內(nèi)化的條件下，并由此形成內(nèi)化的結(jié)合多肽/抗原復(fù)合物的群體，所述方法進(jìn)一步包括洗滌所述的第一細(xì)胞類型，從而除去與所述的外部表面結(jié)合的文庫(kù)成員；并且其中步驟(c)中的分離包括使用對(duì)所述結(jié)合多肽的一部分具有特異性的結(jié)合劑來(lái)分離所述的內(nèi)化的結(jié)合多肽/抗原復(fù)合物，由此識(shí)別特異性地結(jié)合所述的細(xì)胞表面抗原的內(nèi)化結(jié)合多肽。

4.權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括：

在步驟(a)之前，在一定的條件下將所述的抗原與參照結(jié)合劑接觸，從而形成所述的抗原和所述的參照結(jié)合劑的復(fù)合物，

其中所述的參照結(jié)合劑特異性地結(jié)合所述的抗原的不同于所述的結(jié)合多肽所識(shí)別的表位，從而在步驟(a)中形成至少一種結(jié)合多肽/抗原的復(fù)合物；

從而步驟(c)包括識(shí)別結(jié)合多肽，該結(jié)合多肽特異性地結(jié)合所述的抗原的不同于所述的參照結(jié)合劑所識(shí)別的表位。

5.權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括：

在步驟(a)之前，將所述的第一細(xì)胞類型與結(jié)合劑接觸，該結(jié)合劑特異性地結(jié)合所述的細(xì)胞表面抗原并調(diào)控所述的細(xì)胞表面抗原的激活狀態(tài)；

從而步驟(c)包括識(shí)別特異性地結(jié)合所需的激活狀態(tài)的細(xì)胞表面抗原的結(jié)合多肽。

6.權(quán)利要求1-5的任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的多樣的無(wú)細(xì)胞核酸展示文庫(kù)為V結(jié)構(gòu)域文庫(kù)，該文庫(kù)的各個(gè)成員均包含由第一抗體得到的FR1-FR3區(qū)的序列和由第二抗原得到的CDR3-FR4區(qū)的序列。

7.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述的FR1-FR3區(qū)的序列和/或所述的CDR3-FR4區(qū)的序列得自人類的天然免疫譜型，和/或所述的V結(jié)構(gòu)域?yàn)閂H結(jié)構(gòu)域。

8.權(quán)利要求1-5的任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的多樣的無(wú)細(xì)胞核酸展示文庫(kù)為無(wú)細(xì)胞DNA展示文庫(kù)。

9.權(quán)利要求8所述的方法，其中所述的無(wú)細(xì)胞DNA展示文庫(kù)的各個(gè)成員均包含通過(guò)插入的DNA連接體與編碼所述的結(jié)合多肽的DNA編碼序列連接的結(jié)合多肽，其中所述的DNA連接體包含限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)。

10.權(quán)利要求9所述的方法，其中所述的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)不存在于所述的無(wú)細(xì)胞DNA展示文庫(kù)的成員的編碼序列中。