[發明專利]一種攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法

在審

• 申請號: 201910142856.5
• 申請日: 2019-02-26
• 公開（公告）號: CN109762035A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 張英;王仲孚;南麗婧;黃琳娟
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: C07H15/20
• 分類號: C07H15/20;C07H1/00
• 代理公司: 西安智萃知識產權代理有限公司 61221
• 代理人: 方力平

1.一種攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一：制備O-糖鏈的前體類似物：以全乙酰基保護的半乳糖胺為供體，以無水1,2-二氯乙烷為溶劑，以三氟甲烷磺酸銅為催化劑，混合后加入受體，反應溫度為110-135℃，反應時間為6-10h，得O-糖鏈的前體類似物；

步驟二：制備攜帶功能基團O-糖鏈：O-糖鏈的前體類似物經細胞吸收，被細胞中酶利用，加工反應合成攜帶功能基團O-糖鏈，釋放到培養基中；

步驟三：從培養基中純化攜帶功能基團O-糖鏈：利用C18柱純化，先活化平衡、后上樣、經水洗除雜，最后洗脫接樣，得到攜帶功能基團O-糖鏈樣品。

2.如權利要求1所述的攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法，其特征在于：所述O-糖鏈的前體類似物經硅膠柱層析提純，提純后再用于制備攜帶功能基團O-糖鏈，其中，洗脫劑：乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝4：1，展開劑：二氯甲烷：甲醇(v/v)＝15：1。

3.如權利要求1所述的攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法，其特征在于：所述受體的用量為供體用量的4倍當量。

4.如權利要求1所述的攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法，其特征在于：三氟甲烷磺酸銅的用量為供體用量的0.15倍當量。

5.如權利要求1所述的攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法，其特征在于：所述步驟一中反應溫度為130℃，反應時間為6小時。

6.如權利要求1所述的攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法，其特征在于：所述受體為對硝基苯甲醇，對應的O-糖鏈的前體類似物為全乙酰化的對硝基芐基-α-N-乙酰氨基半乳糖，對應的攜帶功能基團O-糖鏈為對硝基芐基-O-糖鏈。

7.如權利要求1所述的攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法，其特征在于：所述受體為對乙炔基苯甲醇，對應的O-糖鏈的前體類似物為全乙酰化的對乙炔基芐基-α-N-乙酰氨基半乳糖，對應的攜帶功能基團O-糖鏈為對乙炔基芐基-O-糖鏈。

8.如權利要求1所述的攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法，其特征在于：所述步驟二中細胞密度達到80％的時候加樣，培養3天，得到帶功能基團的O-糖鏈。

9.如權利要求1所述的攜帶功能基團O-糖鏈的制備方法，其特征在于：所述步驟三具體為：利用C18柱純化，使用前先用2倍柱體積的乙腈活化，再加含0.1％TFA的50％乙腈洗柱10ml，然后水洗20ml平衡，最后上樣，上樣后水洗15ml除雜，然后再用3ml含0.05％TFA的10％乙腈洗脫接樣，得到攜帶功能基團O-糖鏈樣品。