[發(fā)明專利]一種重組的非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白及其制備方法和應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910142630.5 | 申請日： | 2019-02-26 |
| 公開（公告）號： | CN111607000A | 公開（公告）日： | 2020-09-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 錢泓;吳有強;張強;徐玉蘭;吳素芳;車影 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K39/12;G01N33/569;A61P31/20 |
| 代理公司： | 北京乾誠五洲知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11042 | 代理人： | 付曉青;李廣文 |
| 地址： | 312000 浙江省紹興市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 重組 非洲 豬瘟 病毒 p30 單位 可溶性 融合 蛋白 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種重組的非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白，其特征在于，所述非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白包括OPTI-p30蛋白和一種伴侶蛋白，其中所述OPTI-p30蛋白的核苷酸序列為p30蛋白經(jīng)優(yōu)化后的序列OPTI-p30如SEQ ID NO.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白，其特征在于，所述伴侶蛋白為TF蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白，其特征在于，所述非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白的核苷酸序列OPTI-TF-p30是OPTI-p30蛋白的5’端插入TF蛋白的核苷酸序列，所述OPTI-TF-p30蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白，其特征在于，所述非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白，其特征在于，所述非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白在如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列的氨基末端或羧基末端連接有poly-His、FLAG、c-myc、HA和poly-Arg中的一種標簽。
6.一種重組的非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
1)將含有OPTI-p30蛋白和一種伴侶蛋白的基因克隆到原核表達載體中，得到含有非洲豬瘟病毒OPTI-p30蛋白和一種伴侶蛋白編碼基因的重組質(zhì)粒；其中，所述OPTI-p30蛋白的核苷酸序列為經(jīng)優(yōu)化后的序列OPTI-p30如SEQ ID NO.1所示；
2)再將步驟1)所述重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌菌株的細胞中，得到重組表達的菌株；
3)通過培養(yǎng)、篩選步驟2)中所述重組表達的菌株，得到高度表達的菌株；
4)發(fā)酵培養(yǎng)步驟3)中所述高度表達的菌株，純化后得到重組的非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中，所述伴侶蛋白為TF蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，含有非洲豬瘟病毒OPTI-p30蛋白和TF蛋白的核苷酸序列OPTI-TF-p30是OPTI-p30蛋白的5’端插入TF蛋白的核苷酸序列，所述OPTI-TF-p30蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，含有非洲豬瘟病毒OPTI-p30蛋白和TF蛋白的的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，含有非洲豬瘟病毒OPTI-p30蛋白和TF蛋白在如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列的氨基末端或羧基末端連接有poly-His、FLAG、c-myc、HA和poly-Arg中的一種標簽。
11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中，所述原核表達載體為pET28a、pET30a、pBAD、pcold、pQE、或pKK。
12.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中，所述大腸桿菌菌株選自BL21(DE3)、BL21star(DE3)、arcticexpress中的一種菌株。
13.一種如權(quán)利要求1～5任一所述的非洲豬瘟病毒p30亞單位可溶性融合蛋白在制備診斷、預防和治療非洲豬瘟的疫苗中的應(yīng)用。
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