[發(fā)明專利]一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910141932.0
• 申請(qǐng)日: 2019-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN109652314A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 詹艷艷;王新峰;王悅璋;宋亞杰;王姍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 焦作健康元生物制品有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/00
• 分類號(hào): C12N1/00;C12Q1/04
• 代理公司: 鄭州浩德知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 41130
• 代理人: 王國旭

本發(fā)明公開了一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，包括配置培養(yǎng)母液，菌種接種，菌種培育，熒光標(biāo)記，篩選及濃縮提純。本發(fā)明一方面操作簡(jiǎn)單，培育及篩選效率高，且成本低廉，對(duì)環(huán)境污染小，另一方面可有效的提高去甲金霉素菌株產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性和產(chǎn)量，從而極大的提高去甲金霉素菌生產(chǎn)效率和質(zhì)量的同時(shí)，另取得良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法。

背景技術(shù)

去甲金霉素，主要用于米諾環(huán)素和替加環(huán)素的生產(chǎn)。其抗菌性較強(qiáng)，抗菌譜與金霉素相似，其作用比四環(huán)素、土霉素強(qiáng)，比金霉素穩(wěn)定，當(dāng)前生物醫(yī)藥領(lǐng)域中重要的原料產(chǎn)品，但當(dāng)前在進(jìn)行去甲金霉素生產(chǎn)過程中，由于國外對(duì)我國長(zhǎng)期的技術(shù)封鎖，從而導(dǎo)致我國去甲金霉素產(chǎn)品生產(chǎn)工作相對(duì)滯后，缺乏高效可靠，且成本低廉的去甲金霉素產(chǎn)品生產(chǎn)工藝。

而在去甲金霉素產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，去甲金霉素菌株培育及篩選是確保去甲金霉素產(chǎn)品生產(chǎn)效率質(zhì)量的重要基礎(chǔ)，而當(dāng)前在進(jìn)行對(duì)去甲金霉素菌株培育和篩選作業(yè)時(shí)，所采用的方法和工藝往往均為借鑒同類或相似菌種培育及篩選方法開展，雖然一定程度可以滿足去甲金霉素菌株培育及篩選的需要，但工作效率低下，成本相對(duì)較高，易產(chǎn)生大量的污染性廢棄物，且菌株培育質(zhì)量穩(wěn)定性和篩選精度均相對(duì)較差，嚴(yán)重影響了甲金霉素產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量。

因此針對(duì)這一現(xiàn)狀，需要開發(fā)一種全新的去甲金霉素菌株培育及篩選方法，以滿足實(shí)際使用的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明公開了一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)存在的生產(chǎn)效率低和產(chǎn)品質(zhì)量差等問題。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，包括如下步驟：

第一步，配置培養(yǎng)母液，首先根據(jù)使用需要，在培養(yǎng)釜中配置去甲金霉素菌株培養(yǎng)母液，然后在10—30分鐘內(nèi)，將去甲金霉素菌株培養(yǎng)母液勻速升溫至25℃—35℃并保溫，然后對(duì)去甲金霉素菌株培養(yǎng)母液進(jìn)行30—80分鐘超聲波乳化作業(yè)，并在完成超聲波乳化作業(yè)后對(duì)去甲金霉素菌株培養(yǎng)母液保溫靜置10—30分鐘；

第二步，菌種接種，首先在無菌環(huán)境避光條件下，對(duì)培養(yǎng)皿和過承載架進(jìn)行輻照滅活處理，然后通過菌種接種裝置將去甲金霉素菌種均與涂布在若干培養(yǎng)皿上表面，讓后將各培養(yǎng)皿通過承載架沿豎直方向進(jìn)行交錯(cuò)固定，且各培養(yǎng)皿上表面均與水平面平行分布，即可完成菌種接種；

第三步，菌種培育，然后在無菌環(huán)境避光條件下，將第一步配置的培養(yǎng)母液以3—5次/10小時(shí)的頻率均勻噴淋至培養(yǎng)皿上端面的將去甲金霉素菌種上，并在25℃—35℃恒溫環(huán)境下培育2—5天，即可得到將去甲金霉素菌株；且培育過程中，培養(yǎng)皿上端面的培養(yǎng)母液液面高出培養(yǎng)皿上端面的將去甲金霉素菌種上端面1—10毫米，并在每次完成培養(yǎng)母液噴淋后，對(duì)各培養(yǎng)皿進(jìn)行100—160r/min振蕩條件下持續(xù)勻速振蕩10—20分鐘，且振蕩時(shí)培養(yǎng)面上端面與水平面間夾角不大于30°；

第四步，熒光標(biāo)記，完成第三步作業(yè)后，在保持第三步操作條件不變的前提下，繼續(xù)持續(xù)培育1—3天，在進(jìn)行該步驟培育時(shí)，選擇各培養(yǎng)皿中的其中一個(gè)為標(biāo)的培養(yǎng)皿，然后向噴淋到標(biāo)的培養(yǎng)皿的培養(yǎng)母液中混合入生物標(biāo)記物，并使生物標(biāo)記物于培養(yǎng)母液一同噴淋到標(biāo)的培養(yǎng)皿物中；

第五步，篩選，將經(jīng)過培育后第四步中標(biāo)的培養(yǎng)皿中的去甲金霉素菌株進(jìn)行生物標(biāo)記物濃度檢測(cè)，并根據(jù)生物標(biāo)記物濃度分布區(qū)域?qū)?biāo)的培養(yǎng)皿中去甲金霉素菌株進(jìn)行劃分，然后根據(jù)標(biāo)的培養(yǎng)皿中去甲金霉素菌株進(jìn)行劃分分布結(jié)構(gòu)，依次對(duì)剩余各培養(yǎng)皿中菌株進(jìn)行相同分布結(jié)構(gòu)的劃分，從而即可完成不同菌株質(zhì)量劃分篩選作業(yè)；