[發明專利]一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法

在審

• 申請號: 201910141932.0
• 申請日: 2019-02-26
• 公開（公告）號: CN109652314A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 詹艷艷;王新峰;王悅璋;宋亞杰;王姍
• 申請（專利權）人: 焦作健康元生物制品有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12Q1/04
• 代理公司: 鄭州浩德知識產權代理事務所(普通合伙) 41130
• 代理人: 王國旭

1.一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述的去甲金霉素菌株培育及篩選方法包括如下步驟：

第一步，配置培養母液，首先根據使用需要，在培養釜中配置去甲金霉素菌株培養母液，然后在10—30分鐘內，將去甲金霉素菌株培養母液勻速升溫至25℃—35℃并保溫，然后對去甲金霉素菌株培養母液進行30—80分鐘超聲波乳化作業，并在完成超聲波乳化作業后對去甲金霉素菌株培養母液保溫靜置10—30分鐘；

第二步，菌種接種，首先在無菌環境避光條件下，對培養皿和過承載架進行輻照滅活處理，然后通過菌種接種裝置將去甲金霉素菌種均與涂布在若干培養皿上表面，讓后將各培養皿通過承載架沿豎直方向進行交錯固定，且各培養皿上表面均與水平面平行分布，即可完成菌種接種；

第三步，菌種培育，然后在無菌環境避光條件下，將第一步配置的培養母液以3—5次/10小時的頻率均勻噴淋至培養皿上端面的將去甲金霉素菌種上，并在25℃—35℃恒溫環境下培育2—5天，即可得到將去甲金霉素菌株；且培育過程中，培養皿上端面的培養母液液面高出培養皿上端面的將去甲金霉素菌種上端面1—10毫米，并在每次完成培養母液噴淋后，對各培養皿進行100—160r/min振蕩條件下持續勻速振蕩10—20分鐘，且振蕩時培養面上端面與水平面間夾角不大于30°；

第四步，熒光標記，完成第三步作業后，在保持第三步操作條件不變的前提下，繼續持續培育1—3天，在進行該步驟培育時，選擇各培養皿中的其中一個為標的培養皿，然后向噴淋到標的培養皿的培養母液中混合入生物標記物，并使生物標記物于培養母液一同噴淋到標的培養皿物中；

第五步，篩選，將經過培育后第四步中標的培養皿中的去甲金霉素菌株進行生物標記物濃度檢測，并根據生物標記物濃度分布區域對標的培養皿中去甲金霉素菌株進行劃分，然后根據標的培養皿中去甲金霉素菌株進行劃分分布結構，依次對剩余各培養皿中菌株進行相同分布結構的劃分，從而即可完成不同菌株質量劃分篩選作業；

第六步，濃縮提純，根據第五步劃分篩選的結果，對除標的培養皿外的其他培養皿中的同區域內的去甲金霉素菌株進行分類收集匯合，然后將不符合標準的區域內的去甲金霉素菌株進行去除并無害化處理，對各區域內的去甲金霉素菌株的濃度機發育狀態分別進行濃縮提純，并使濃縮提純后各區域內的去甲金霉素菌株的濃度機發育狀態保持一致后進行二次匯合即可得到成品。

2.根據權利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，第一步中，所述培養母液以下質量份數物質構成：葡萄糖1%—3.5%、蛋白胨0.5%—2.3%、EDTA0.1%—0.5%、Ca(ClO)₂0.5%—1.3%、MgSO₄1.1%—2.5%、(NH₄)₂Fe(SO4)₂·6H₂O0.8%—4.3%，余量為生理鹽水。

3.根據權利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述第二部中，承載架為軸線與水平面垂直分布的框架結構，所述培養皿包括橫斷面呈“凵”字型槽狀結構的基體及位于基體內與基體同軸分布并呈網板板狀結構的托盤，所述基體下端面與承載架通過轉臺機構相互鉸接，所述托盤下端面雨基體底部間間距為0—5毫米，上端面低于培養皿至少3毫米。

4.根據權利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述第四步中的生物標記物為熒光標記物及同位素標記物中的任意一種或兩種共用。

5.根據權利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述第四步中的生物標記物在培養母液中的濃度為3%—10%。

6.根據權利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述第六步中，不符合標準的區域內的去甲金霉素菌株進行無害化處理時，采用輻照滅活、生物發酵及高溫焚燒中的任意一種或幾種同時使用。