[發(fā)明專利]一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910141932.0
• 申請日: 2019-02-26
• 公開（公告）號: CN109652314A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 詹艷艷;王新峰;王悅璋;宋亞杰;王姍
• 申請（專利權(quán)）人: 焦作健康元生物制品有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12Q1/04
• 代理公司: 鄭州浩德知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 41130
• 代理人: 王國旭

1.一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述的去甲金霉素菌株培育及篩選方法包括如下步驟：

第一步，配置培養(yǎng)母液，首先根據(jù)使用需要，在培養(yǎng)釜中配置去甲金霉素菌株培養(yǎng)母液，然后在10—30分鐘內(nèi)，將去甲金霉素菌株培養(yǎng)母液勻速升溫至25℃—35℃并保溫，然后對去甲金霉素菌株培養(yǎng)母液進(jìn)行30—80分鐘超聲波乳化作業(yè)，并在完成超聲波乳化作業(yè)后對去甲金霉素菌株培養(yǎng)母液保溫靜置10—30分鐘；

第二步，菌種接種，首先在無菌環(huán)境避光條件下，對培養(yǎng)皿和過承載架進(jìn)行輻照滅活處理，然后通過菌種接種裝置將去甲金霉素菌種均與涂布在若干培養(yǎng)皿上表面，讓后將各培養(yǎng)皿通過承載架沿豎直方向進(jìn)行交錯固定，且各培養(yǎng)皿上表面均與水平面平行分布，即可完成菌種接種；

第三步，菌種培育，然后在無菌環(huán)境避光條件下，將第一步配置的培養(yǎng)母液以3—5次/10小時(shí)的頻率均勻噴淋至培養(yǎng)皿上端面的將去甲金霉素菌種上，并在25℃—35℃恒溫環(huán)境下培育2—5天，即可得到將去甲金霉素菌株；且培育過程中，培養(yǎng)皿上端面的培養(yǎng)母液液面高出培養(yǎng)皿上端面的將去甲金霉素菌種上端面1—10毫米，并在每次完成培養(yǎng)母液噴淋后，對各培養(yǎng)皿進(jìn)行100—160r/min振蕩條件下持續(xù)勻速振蕩10—20分鐘，且振蕩時(shí)培養(yǎng)面上端面與水平面間夾角不大于30°；

第四步，熒光標(biāo)記，完成第三步作業(yè)后，在保持第三步操作條件不變的前提下，繼續(xù)持續(xù)培育1—3天，在進(jìn)行該步驟培育時(shí)，選擇各培養(yǎng)皿中的其中一個為標(biāo)的培養(yǎng)皿，然后向噴淋到標(biāo)的培養(yǎng)皿的培養(yǎng)母液中混合入生物標(biāo)記物，并使生物標(biāo)記物于培養(yǎng)母液一同噴淋到標(biāo)的培養(yǎng)皿物中；

第五步，篩選，將經(jīng)過培育后第四步中標(biāo)的培養(yǎng)皿中的去甲金霉素菌株進(jìn)行生物標(biāo)記物濃度檢測，并根據(jù)生物標(biāo)記物濃度分布區(qū)域?qū)?biāo)的培養(yǎng)皿中去甲金霉素菌株進(jìn)行劃分，然后根據(jù)標(biāo)的培養(yǎng)皿中去甲金霉素菌株進(jìn)行劃分分布結(jié)構(gòu)，依次對剩余各培養(yǎng)皿中菌株進(jìn)行相同分布結(jié)構(gòu)的劃分，從而即可完成不同菌株質(zhì)量劃分篩選作業(yè)；

第六步，濃縮提純，根據(jù)第五步劃分篩選的結(jié)果，對除標(biāo)的培養(yǎng)皿外的其他培養(yǎng)皿中的同區(qū)域內(nèi)的去甲金霉素菌株進(jìn)行分類收集匯合，然后將不符合標(biāo)準(zhǔn)的區(qū)域內(nèi)的去甲金霉素菌株進(jìn)行去除并無害化處理，對各區(qū)域內(nèi)的去甲金霉素菌株的濃度機(jī)發(fā)育狀態(tài)分別進(jìn)行濃縮提純，并使?jié)饪s提純后各區(qū)域內(nèi)的去甲金霉素菌株的濃度機(jī)發(fā)育狀態(tài)保持一致后進(jìn)行二次匯合即可得到成品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，第一步中，所述培養(yǎng)母液以下質(zhì)量份數(shù)物質(zhì)構(gòu)成：葡萄糖1%—3.5%、蛋白胨0.5%—2.3%、EDTA0.1%—0.5%、Ca(ClO)₂0.5%—1.3%、MgSO₄1.1%—2.5%、(NH₄)₂Fe(SO4)₂·6H₂O0.8%—4.3%，余量為生理鹽水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述第二部中，承載架為軸線與水平面垂直分布的框架結(jié)構(gòu)，所述培養(yǎng)皿包括橫斷面呈“凵”字型槽狀結(jié)構(gòu)的基體及位于基體內(nèi)與基體同軸分布并呈網(wǎng)板板狀結(jié)構(gòu)的托盤，所述基體下端面與承載架通過轉(zhuǎn)臺機(jī)構(gòu)相互鉸接，所述托盤下端面雨基體底部間間距為0—5毫米，上端面低于培養(yǎng)皿至少3毫米。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述第四步中的生物標(biāo)記物為熒光標(biāo)記物及同位素標(biāo)記物中的任意一種或兩種共用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述第四步中的生物標(biāo)記物在培養(yǎng)母液中的濃度為3%—10%。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種去甲金霉素菌株培育及篩選方法，其特征在于，所述第六步中，不符合標(biāo)準(zhǔn)的區(qū)域內(nèi)的去甲金霉素菌株進(jìn)行無害化處理時(shí)，采用輻照滅活、生物發(fā)酵及高溫焚燒中的任意一種或幾種同時(shí)使用。