[發明專利]一種小鼠子宮原代基質細胞體外誘導蛻膜化的方法

有效

• 申請號: 201910140332.2
• 申請日: 2019-02-17
• 公開（公告）號: CN109777766B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 張晉平;譚毅;丁蘭;丁艷平;孔維寶;王俊龍;羅文萍;傅龍飛;馬君義
• 申請（專利權）人: 西北師范大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種小鼠子宮原代基質細胞體外誘導蛻膜化的方法，其特征在于，包括以下操作步驟：

(1)取正常妊娠第4天小鼠的子宮組織，采用胰酶溶液消化處理后，去除上皮細胞，得到組織塊；

(2)將組織塊采用質量分數為0.2％的膠原酶II再次進行消化處理后，向其中加入組織塊質量10-15％的離心助劑，然后將混合物進行離心處理，棄去上清液后，加入質量分數為10％的PBS溶液調整細胞濃度，得到小鼠子宮原代基質細胞的單細胞懸液，其中離心助劑由以下重量份的組分制成：干酪素鈉17-22份、透明質酸鈉25-30份、α-酮戊二酸13-16份；

(3)將步驟(2)得到的單細胞懸液培養至細胞密度達到75-85％匯合后，換液，去除雜細胞后，向其中加入誘導培養基，誘導小鼠子宮原代基質細胞發生蛻膜化，其中誘導培養基為含有10-15nM 17β-雌二醇、1-3μM孕酮、8-12μM鹽酸異丙腎上腺素和2％質量分數木炭處理胎牛血清的DMEM-F12培養基。

2.如權利要求1所述的一種小鼠子宮原代基質細胞體外誘導蛻膜化的方法，其特征在于，上述步驟(1)中，胰酶溶液為胰酶和EDTA溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中，經過濾除菌制成，其中胰酶的終質量分數為0.25％，EDTA的終質量分數為0.02％。

3.根據權利要求1所述的一種小鼠子宮原代基質細胞體外誘導蛻膜化的方法，其特征在于，上述步驟(1)中和步驟(2)中，消化處理的操作為：放在4℃冰箱和37℃細胞培養箱中各消化40min后，采用質量分數為10％的PBS溶液終止消化反應。

4.根據權利要求1所述的一種小鼠子宮原代基質細胞體外誘導蛻膜化的方法，其特征在于，上述步驟(2)中，離心處理時，離心機的轉速為3000rpm，離心時間為15min。