[發明專利]豬流行性腹瀉病毒S2蛋白間接ELISA抗體檢測方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201910140122.3
• 申請日: 2019-02-26
• 公開（公告）號: CN109884314B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 秦毅斌;趙武;劉磊;盧冰霞;何穎;陳忠偉;周英寧;李斌;梁家幸;閉炳芬;段群棚;蔣冬福;盧敬專;蘇乾蓮
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司 45104
• 代理人: 楊立華

本發明公開了一種豬流行性腹瀉病毒S2蛋白間接ELISA抗體檢測試劑盒，包括包被酶標板，包被酶標板以重組S2蛋白作為包被抗原。據此，還建立相應ELISA檢測方法并進行臨床應用，為檢測PEDV抗體提供了一種有實際價值的診斷工具。應用本發明可建立識別豬流行性腹瀉病毒感染產生的抗體的方法，具有較高的特異性與敏感性，該法操作簡單，耗時短，成本低，可大批量檢測，對該病的防控與凈化具有重要意義。

技術領域

本發明屬于豬流行性腹瀉病毒技術領域，尤其涉及一種豬流行性腹瀉病毒S2蛋白間接ELISA抗體檢測方法及其試劑盒。

背景技術

豬流行性腹瀉(porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea Virus,PEDV)引起的一種高度接觸性的急性傳染病，以糞口途徑傳播為主，感染豬會出現嘔吐、水樣腹瀉、脫水等癥狀，乳豬會出現脫水、酸中毒死亡，豬只年齡越小死亡率越高。豬流行性腹瀉病最初于20世紀70年代報道于英國和比利時，隨后包括中國、菲律賓、韓國等在內的多個亞洲國家也先后報道本病的發生。2010年底開始，我國多個省市或地區陸續報道PED大規模暴發，且免疫過流行性腹瀉疫苗的規模化豬場也爆發了PED，新生仔豬大量死亡，損失慘重。美洲于2013年也首次暴發PED，后證實是病毒的變異導致PEDV在美洲國家和地區的大流行，給養豬業造成了巨大的經濟損失。

豬流行性腹瀉病毒(PEDV)是單鏈正股RNA病毒，在遺傳分類上屬于套式病毒目冠狀病毒科冠狀病毒屬。PEDV基因組共編碼4種主要結構蛋白，即核衣殼蛋白(N)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和纖突蛋白(S)。S蛋白位于病毒粒子表面，由1 383個氨基酸組成，分為兩個功能區即S1(1～789aa)和S2(790～1 383aa)，S蛋白在介導病毒粒子進入細胞和誘導機體產生中和抗體的過程中起到關鍵作用。我國2010年底以后，從發病豬腸道或糞便中分離到的PEDV流行毒株主要為變異毒株，其與經典疫苗株CV777相比，在S基因上有很多的變異，這可能使病毒毒力增強或者改變了病毒的免疫逃避機制，促使PED在中國的大暴發。Sun等報道，S1蛋白636～789aa是一段高度保守的區域，能夠誘導機體產生中和抗體。孫東波使用絲狀噬菌體展示系統鑒定出S蛋白的S1區域具有5個線性抗原表位區域和1個中和表位。桂銳等原核表達了PEDV部分S1蛋白(60-845bp)，重組蛋白得到了表達且具有良好的反應原性，能夠被兔PEDV多抗血清識別。前述研究主要針對PEDV S蛋白S1區域功能，而對PEDV S蛋白S2區域的抗原性等功能研究較少。

豬流行性腹瀉抗體的檢測方法主要有間接免疫熒光試驗(IFA)、病毒中和試驗(VN)、免疫過氧化物酶單層試驗(IPMA)及酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。相比其他檢測方法，ELISA方法較為簡便、敏感，適合于批量樣品的檢測和評價。國內外學者先后建立了針對PEDV全病毒以及基于重組N蛋白、S1蛋白的ELISA抗體檢測方法。姜艷平等以原核表達的重組N蛋白作為檢測抗原,優化ELISA反應條件,建立了PEDV間接ELISA抗體檢測方法。Gerber等基于真核表達的PEDV S1重組蛋白建立了S1蛋白抗體的間接ELISA檢測方法，對IgG和IgA都有良好反應；姚作俊等應用重組PEDV部分纖突蛋白作為檢測抗原，建立了基于PEDV S1蛋白的間接ELISA抗體檢測方法，并將該方法用于檢測產前4周免疫了PED滅活苗的母豬在分娩當天的母豬血清、初乳以及不同日齡仔豬血清中的PEDV抗體。而目前還沒有基于PEDV S2重組蛋白建立的間接ELISA抗體檢測方法的報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種豬流行性腹瀉病毒S2蛋白間接ELISA抗體檢測方法及其試劑盒。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：

豬流行性腹瀉病毒S2蛋白間接ELISA抗體檢測試劑盒，包括包被酶標板，包被酶標板以重組S2蛋白作為包被抗原。

重組S2蛋白由序列表SEQ.ID.No.1的基因堿基序列編碼或者具有SEQ.ID.No.2的氨基酸序列。