[發明專利]豬流行性腹瀉病毒S2蛋白間接ELISA抗體檢測方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201910140122.3
• 申請日: 2019-02-26
• 公開（公告）號: CN109884314B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 秦毅斌;趙武;劉磊;盧冰霞;何穎;陳忠偉;周英寧;李斌;梁家幸;閉炳芬;段群棚;蔣冬福;盧敬專;蘇乾蓮
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.一種豬流行性腹瀉病毒S2蛋白間接ELISA抗體檢測試劑盒，包括包被酶標板，其特征在于：所述包被酶標板以重組S2蛋白作為包被抗原；所述重組S2蛋白由序列表SEQ.ID.No.1的基因堿基序列編碼或者是SEQ.ID.No.2的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述的ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于還包括陰性血清、陽性血清、HRP標記的山羊抗豬IgG抗體、洗滌液、稀釋液、包被液、封閉液、底物液、終止液；所述洗滌液為PBS+0.05％Tween-20；所述稀釋液為PBS+2％脫脂奶粉+0.05％Tween-20；所述包被液為0.05M pH9.6 Na₂CO₃-NaHCO₃緩沖液；所述底物液為單組份TMB底物顯色液；所述封閉液為PBS+5％脫脂奶粉；所述終止液為2M H₂SO₄溶液。

3.一種豬流行性腹瀉病毒S2蛋白間接ELISA抗體檢測方法，其特征在于按以下操作進行：包被抗原：將重組S2蛋白以包被液稀釋后加入酶標板中包被，100μL/孔，得包被酶標板；所述重組S2蛋白由序列表SEQ.ID.No.1的基因堿基序列編碼或者是SEQ.ID.No.2的氨基酸序列；

洗滌：棄去包被液并用洗滌液洗滌；

封閉：每孔加入250μL封閉液，37℃封閉，棄去封閉液洗滌；

孵育一抗：將豬血清與稀釋液混勻，100μL/孔，37℃孵育，棄去并洗滌；

孵育二抗：將HRP標記的山羊抗豬IgG抗體與稀釋液混勻，100μL/孔，37℃孵育，棄去并洗滌；

顯色讀數：以100μL/孔加入底物液，室溫顯色反應后加入終止液，酶標儀讀取OD₄₅₀值。

4.根據權利要求3所述的ELISA抗體檢測方法，其特征在于：所述重組S2蛋白以包被液稀釋至8μg/mL，所述HRP標記的山羊抗豬IgG抗體的稀釋度為1:4000。

5.根據權利要求4所述的ELISA抗體檢測方法，其特征在于：所述包被為4℃包被過夜加37℃包被2h。

6.根據權利要求5所述的ELISA抗體檢測方法，其特征在于：所述封閉時間為120分鐘。

7.根據權利要求6所述的ELISA抗體檢測方法，其特征在于：所述豬血清的稀釋度為1:40，孵育時間為120min。

8.根據權利要求7所述的ELISA抗體檢測方法，其特征在于：所述孵育二抗的反應時間為45分鐘。

9.根據權利要求8所述的ELISA抗體檢測方法，其特征在于：所述顯色反應時間為15分鐘。