[發明專利]一種靶向性抗腫瘤T細胞及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910134461.0
• 申請日: 2019-02-23
• 公開（公告）號: CN111378623B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 何清;廖雪姣;王輝;唐奇遠;舒丹;唐嫻
• 申請（專利權）人: 深圳市第三人民醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

本發明提供了一種靶向性抗腫瘤T細胞，包括靶向CD133的嵌合抗原受體CAR?CD133和靶向AFP的嵌合抗原受體CAR?AFP，該T細胞能同時識別兩種不同的肝癌靶點CD133及AFP，對腫瘤細胞的靶向識別性廣且強，可避免腫瘤細胞出現靶點逃逸，擴大了其廣譜殺傷性，提升了腫瘤殺傷能力，增強了免疫細胞的體內持久性。本發明還提供了該靶向性抗腫瘤T細胞的制備方法和應用。

技術領域

本發明涉及醫學生物領域，特別涉及一種靶向性抗腫瘤T細胞及其制備方法和應用。

背景技術

肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界范圍內排位第五位的最常見的惡性腫瘤。在我國，每年由于肝癌死亡的人數超過十萬。而嵌合抗原受體T細胞(ChimericAntigen Receptor T-Cell，CAR-T)作為當前最新的免疫細胞技術之一，因其治療腫瘤具有特異性強、幾乎無毒副作用的巨大優勢而彌補了傳統療法的弊端，受到了廣泛的關注和研究。它是將經過CAR改造的T細胞回輸至人體，激活自身免疫系統，對腫瘤細胞進行殺傷，以達到清除惡性腫瘤細胞的目的，被認為最有可能徹底清除腫瘤細胞的方法。

但目前CAR-T技術的應用還局限于白血病、骨髓瘤、淋巴瘤等血液系統腫瘤，在諸如肝癌等實體腫瘤中的應用較少，且在復雜的腫瘤微環境中(如多種腫瘤抗原同時出現的情況)，CAR-T細胞對腫瘤細胞的識別、殺傷能力大大降低，限制了其臨床應用。

發明內容

鑒于此，本發明提供了一種針對肝癌的靶向性抗腫瘤T細胞及其制備方法和應用。該T細胞可高效靶向至肝癌細胞的兩個腫瘤靶點，對肝癌細胞的靶向性高、識別性較廣且強，可避免腫瘤細胞出現靶點逃逸，具有較強的肝癌細胞殺傷性。

第一方面，本發明提供了一種靶向性抗腫瘤T細胞，所述靶向性抗腫瘤T細胞為帶靶向CD133的嵌合抗原受體CAR-CD133和帶靶向AFP的嵌合抗原受體CAR-AFP的雙靶點嵌合抗原受體T細胞，或者為帶所述CAR-CD133的嵌合抗原受體T細胞和帶所述CAR-AFP的嵌合抗原受體T細胞的混合，或者為帶所述CAR-CD133的嵌合抗原受體T細胞和帶所述CAR-AFP的嵌合抗原受體T細胞的一種或多種與帶所述CAR-CD133和所述CAR-AFP的雙靶點嵌合抗原受體T細胞的混合；其中，所述CAR-CD133包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向CD133的單鏈抗體、胞外鉸鏈區、跨膜區和胞內信號區的氨基酸序列，所述CAR-AFP包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向AFP的單鏈抗體、胞外鉸鏈區、跨膜區和胞內信號區的氨基酸序列；其中，所述靶向CD133的單鏈抗體的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向AFP的單鏈抗體的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

其中，當所述靶向性抗腫瘤T細胞為帶CAR-CD133和CAR-AFP的雙靶點CAR-T時，嵌合抗原受體CAR-CD133和CAR-AFP的分布位置不作限定，可以是交替分布(例如ABAB…，AABABB…)或依次分布(例如AAAA…BBB…)，但兩者之間并無共價連接，此時它們相應的CD133單鏈抗體和AFP單鏈抗體之間也并無共價連接，這樣可使它們保持較好的識別能力。

上述“從氨基端到羧基端順次連接”具體為：所述靶向CD133的單鏈抗體或所述靶向AFP的單鏈抗體的氨基酸序列的羧基端與所述胞外鉸鏈區的氨基酸序列的氨基端相連，所述胞外鉸鏈區的氨基酸序列的羧基端與所述跨膜區的氨基酸序列的氨基端相連，所述跨膜區的氨基酸序列的羧基端與所述胞內信號區的氨基酸序列的氨基端相連。

上述提及的CD133為5次跨膜糖蛋白，是公認的腫瘤干細胞標志物，在多種腫瘤組織中表達，可能與臨床肝癌復發和轉移有關，是較為常用的肝癌干細胞標志物。AFP(甲胎蛋白)與肝癌及多種腫瘤的發生發展密切相關，目前臨床上主要作為原發性肝癌的血清標志物。而本發明上述靶向性抗腫瘤T細胞帶有CAR-CD133和CAR-AFP，能同時識別兩種不同的肝癌靶點CD133及AFP，有效避免肝癌細胞出現免疫逃逸。