[發(fā)明專(zhuān)利]一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910134091.0
• 申請(qǐng)日: 2019-02-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109675112B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董亞兵;朱寧文;朱迎春
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海仁康科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61L27/36
• 分類(lèi)號(hào): A61L27/36;A61L27/60
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

本發(fā)明公開(kāi)了一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，具體步驟如下：取儲(chǔ)存的人源皮膚；清除皮下附帶脂肪成分；用碘伏及酒精清洗消毒，后用低滲溶液反復(fù)浸泡清洗皮膚；用Dispase II溶液處理過(guò)夜；去除表皮，后用生理鹽水清洗，獲得真皮；用高滲鹽溶液處理；用生理鹽水清洗；用脫細(xì)胞液在透析裝置中處理，獲得脫細(xì)胞真皮基質(zhì)；用生理鹽水清洗，得到人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)。本發(fā)明的制備方法簡(jiǎn)便，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單可靠，提高生產(chǎn)效率，節(jié)約生產(chǎn)成本，可以最大程度減輕環(huán)境污染，同時(shí)獲得的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)保留了皮膚基底膜，更利于細(xì)胞黏附增殖，同時(shí)脫細(xì)胞真皮含有豐富的生長(zhǎng)因子，具有良好的生物相容性，更有利于支持細(xì)胞的生長(zhǎng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)療材料技術(shù)領(lǐng)域，更具體的說(shuō)是涉及一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法。

背景技術(shù)

真皮替代物在創(chuàng)面愈合過(guò)程中具有重要作用，能夠在創(chuàng)面底部提供真皮支架，提高培養(yǎng)表皮膜片的成活率，減小創(chuàng)面收縮和瘢痕形成。對(duì)于大面積燒傷或者創(chuàng)傷的病人來(lái)說(shuō)，皮膚移植是最好的治療方法。脫細(xì)胞真皮基質(zhì)(ADM)具有與皮膚真皮近似的內(nèi)在結(jié)構(gòu)，作為真皮替代物在國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)、臨床中均得到應(yīng)用。

目前脫細(xì)胞真皮基質(zhì)主要分為兩類(lèi)：異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)和異種的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)。相比異種的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)，實(shí)踐和臨床的使用證實(shí)，來(lái)源于人的尸體皮制作的同種異體脫細(xì)胞真皮作為真皮替代物最為理想，其機(jī)械性能與正常皮膚接近，組織相容性較好，免疫排斥反應(yīng)較小，更適合皮膚缺損的修復(fù)。

脫細(xì)胞真皮基質(zhì)制備的目的是盡可能的去除皮膚組織中的細(xì)胞成分(包括表皮細(xì)胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中的血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等)，盡可能保留細(xì)胞外基質(zhì)成分以及真皮組織完整的三維結(jié)構(gòu)。這樣能提供引導(dǎo)組織再生的生物支架，達(dá)到最大限度修復(fù)組織缺損的目的。雖然目前脫細(xì)胞真皮基質(zhì)制備方法很多，但都或多或少存在一定問(wèn)題：目前脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法均十分繁雜，需要酶消化，堿液處理等，步驟繁復(fù)，工藝復(fù)雜，大大增加了生產(chǎn)成本；目前脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法中大部分均使用了化學(xué)固定劑，如戊二醛等，這大大改變了脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)，并阻礙了脫細(xì)胞真皮基質(zhì)在生物體內(nèi)的降解；同時(shí)戊二醛殘留造成了脫細(xì)胞產(chǎn)品較大的細(xì)胞和遺傳毒性，極大地影響臨床使用；目前也有很多的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)制備方法引入了堿溶液及有機(jī)溶劑處理，這不僅影響脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的結(jié)構(gòu)，同時(shí)也加大了環(huán)境污染的可能性，廢液的處理也增加了成本；如反復(fù)凍融法，此方法屬于利用物理方法進(jìn)行脫細(xì)胞處理，時(shí)間久、周期長(zhǎng)，現(xiàn)在基本己經(jīng)不用。

因此，提供一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，保證獲得的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)細(xì)胞毒性低、遺傳毒性低，生物相容性高，獲得的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)主要用于皮膚及黏膜缺損的修復(fù)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，具體步驟如下：

(1)取儲(chǔ)存的人源皮膚；

(2)清除皮下附帶脂肪成分；

(3)將步驟(2)清除皮下附帶脂肪成分的皮膚，用碘伏及酒精清洗消毒，后用低滲溶液反復(fù)浸泡清洗皮膚；

(4)將步驟(3)清洗后的皮膚用2.5mg/ml Dispase II溶液處理過(guò)夜；

(5)棄去Dispase II溶液，去除表皮，后用生理鹽水清洗，獲得真皮；

(6)將步驟(5)獲得的真皮用含有Ca²⁺的高滲鹽溶液處理12-24h；

(7)棄去高滲鹽溶液后，用生理鹽水清洗；

(8)將步驟(7)清洗后的真皮置于配制好的“脫細(xì)胞液”中，在“透析裝置”中處理2h-6h，獲得脫細(xì)胞真皮基質(zhì)；