[發(fā)明專利]一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910134091.0
• 申請(qǐng)日: 2019-02-22
• 公開（公告）號(hào): CN109675112B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 董亞兵;朱寧文;朱迎春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海仁康科技有限公司
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36;A61L27/60
• 代理公司: 北京慕達(dá)星云知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

1.一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

（1）取儲(chǔ)存的人源皮膚；

（2）清除皮下附帶脂肪成分；

（3）將步驟（2）清除皮下附帶脂肪成分的皮膚，用碘伏及酒精清洗消毒，后用低滲溶液反復(fù)浸泡清洗皮膚；

（4）將步驟（3）清洗后的皮膚用2.5mg/ml Dispase II溶液處理過夜；

（5）棄去Dispase II溶液，去除表皮，后用生理鹽水清洗，獲得真皮；

（6）將步驟（5）獲得的真皮用含有Ca²⁺的高滲鹽溶液處理12-24h；

（7）棄去高滲鹽溶液后，用生理鹽水清洗；

（8）將步驟（7）清洗后的真皮置于配制好的“脫細(xì)胞液”中，在“透析裝置”中處理2h-6h，獲得脫細(xì)胞真皮基質(zhì)；

（9）將步驟（8）獲得的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)用生理鹽水清洗3次，每次15min，得到人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)；

步驟（8）所述的“脫細(xì)胞液”包含以下組分：0.1% - 0.5wt%胰酶，0.5-5mM EDTA，0.1%-0.5wt% TritonX-100，Na⁺ 0.1-0.5 mol/L，Cl^- 0.1-0.5 mol/L，Ca²⁺ 1-10 mmol/L；Ca²⁺來自Ca(NO₃)₂，NO₃^- 2-20 mmol/L；或包含以下組分：0.1%-0.5wt%胰酶，0.5-5mM EDTA，0.1%-0.5wt% TritonX-100，Na⁺ 0.1-0.5 mol/L，Cl^- 0.1-0.6 mol/L，Ca²⁺ 1-10 mmol/L；Ca²⁺來自CaCl₂；

步驟（8）所述的透析裝置：將同種異體皮膚置于透析袋中，脫細(xì)胞液從一端進(jìn)入，從裝置另一端流出，在脫細(xì)胞的同時(shí)將脫細(xì)胞液中“有害”離子透析除去，在保證脫細(xì)胞效果的同時(shí)最大程度降低脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的細(xì)胞毒性和遺傳毒性，有效地提高生物相容性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，其特征在于，所述步驟（3），將步驟（2）清除皮下附帶脂肪成分的皮膚，用2%碘伏清洗消毒，用75%酒精脫碘，再用無菌蒸餾水反復(fù)浸泡清洗皮膚。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，其特征在于，所述步驟（6），將步驟（5）獲得的真皮用0.5-3mol/L含有Ca²⁺的高滲鹽溶液處理12-24h，Ca²⁺的終濃度為1-10mM/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種人源的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法，其特征在于，所述高滲鹽溶液為0.5-3mol/L含有Ca²⁺的氯化鈉溶液，Ca²⁺的終濃度為1-10mM/L。