[發明專利]一種flagellin-fiber2融合蛋白、其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201910133195.X
• 申請日: 2019-02-22
• 公開（公告）號: CN109867727A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 侯磊;劉爵;韋莉;王菁;全榮;朱珊珊
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/866;C12N15/66;A61K39/39;A61K39/235;A61P31/20
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發明提供了一種flagellin?fiber2融合蛋白、其制備方法和應用，所述融合蛋白具有較高免疫保護性的禽4型腺病毒fiber2蛋白和鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白的融合蛋白。制備方法是通過將人工編碼的flagellin?fiber2基因融合克隆進pFastBac?HA表達載體，經基因轉座形成重組的Bacmid，隨后轉染入Sf9昆蟲細胞，利用桿狀病毒系統表達這個融合蛋白，并通過間接免疫熒光IFA和Western blot進行鑒定。通過上述系統獲得重組桿狀病毒的周期短，將其flagellin?fiber2融合蛋白免疫SPF雞，結果顯示桿狀病毒系統表達的flagellin?fiber2融合蛋白具有較高的免疫保護力。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種禽4型腺病毒fiber2蛋白與鼠傷寒沙門氏菌flagellin蛋白的融合蛋白flagellin-fiber2，其制備方法和應用。

背景技術

禽腺病毒（Fowl Adenovirus，FAdV）是腺病毒科禽腺病毒屬的成員，是DNA病毒，是禽類及野禽體內常見的傳染病病原之一。FAdV可根據群特異性抗原分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個群。根據交叉中和試驗的測定結果，可將Ⅰ群禽腺病毒其分為12個血清型，并且不同的血清型之間具有相同的群抗原。近幾年，臨床上由Ⅰ亞群禽腺病毒感染而引起雞的包涵體肝炎（Inclusion body hepatitis，IBH）、心包積水綜合征（Hydropericardium syndrome，HPS）等臨床病例顯著增多，其中以禽4型腺病毒感染數量居多，主要引起肉雞、育雛和育成期蛋雞發病，感染雞呈急性發病，在不表現任何臨床癥狀的情況下突然死亡，死亡率最高可達到80%。該病具有發病急，易于傳播且傳播速度快等特點，給養禽業造成巨大的經濟損失，已引起世界各地廣泛關注。

目前防控禽4型腺病毒病的主要方法是接種疫苗，生產中使用的疫苗主要是FAdV-4 全病毒滅活疫苗。疫苗對防制禽4型腺病毒病有一定的效果，但該病仍然發生和流行，說明僅能產生體液免疫應答能力的滅活疫苗，不能很好地控制禽4型腺病毒病。體液免疫和細胞免疫在機體的免疫系統中起著重要的作用，而目前使用的滅活疫苗不能刺激機體產生細胞免疫應答，導致防控FAdV-4感染的效果不完美，因此，如何研制出能同時激活體液免疫和細胞免疫應答是FAdV-4疫苗研究的方向。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供一種flagellin- fiber2融合蛋白，其為具有良好免疫原性和反應性，且沒有有安全隱患、并對禽4型腺病毒病具有高免疫保護效果的融合蛋白，上述的flagellin- fiber2融合蛋白是鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白（flagellin）和禽4型腺病毒fiber2蛋白的融合蛋白。

為實現上述目的，本發明采用以下的技術方案為：

一種flagellin- fiber2融合蛋白，其為禽4型腺病毒fiber2 蛋白與去除毒力的鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白flagellin融合表達的蛋白。

如上所述的flagellin- fiber2融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一種編碼上述flagellin-fiber2 融合蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQID NO.2所示；

或所述基因為編碼如SEQ ID NO.1所示的氨基酸的基因序列進行的替換、添加、缺失一個或多個核苷酸，并具有與SEQ ID NO.1所示氨基酸有完整編碼基因具有相同功能的核苷酸序列。