[發明專利]干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法

在審

• 申請號: 201910122725.0
• 申請日: 2019-02-19
• 公開（公告）號: CN109777765A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 冷毅斌;吳亭
• 申請（專利權）人: 武漢普諾賽生命科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/079
• 代理公司: 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 王振宇

本發明提供改進的干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法，包括基礎細胞培養基和添加物組成；所述基礎培養基中包括注射用水或者采用同級別的超純水，碳水化合物、氨基酸、維生素、甲殼素、殼聚糖、無機鹽及微量元素；還包括脂類及前體，核苷、生長因子及轉運蛋白，還原劑、保護劑和誘導劑；所述添加物為乙醇胺和丁酸鈉；所述乙醇胺的終濃度為9.88?10.12mg/L，所述丁酸鈉的終濃度為9.73?10.27mg/L，所述轉鐵蛋白的終濃度為1.86?2.14mg/L。該干細胞培養基能更快速擴增不同來源的干細胞，讓細胞的擴增速度提高3?5倍，但又不影響其分化的潛能，同時延長了傳代次數，而且又能很好的保持干細胞的潛能性。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，更具體地，涉及干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法。

背景技術

體外培養動物細胞時，通常需要在培養基中加入血清，用于提供細胞生長所需的營養物質及生長環境，但血清存在價格昂貴、極易感染病毒或支原體、成分復雜不利于進行細胞產品的分離純化等諸多缺點。隨著現代生物技術的發展，科學家們開始尋求一種新的替代培養基——無血清培養基。

無血清培養基(Serum Free Medium，SFM)，是指在基礎細胞培養基基礎上，添加成分完全確定或部分確定的血清替代成分形成的培養基，適合大規模生產，被廣泛應用于細胞生物學、藥理學、腫瘤學領域。

動物細胞培養技術近年來發展迅速，已經成為生物工程領域中的前沿研究課題之一。其在生物制品的生產、腫瘤細胞的體外建模、病毒的分離鑒定和機體發育功能研究等方面均有重要應用。通常，為了提供細胞生長所需的激素、生長因子等物質，動物細胞是在含血清的培養基中進行培養的。但血清成分復雜且不完全明確，批次間容易產生較大差異，培養中易發生外源物污染，并且血清本身價格也比較昂貴等；這些均使得血清在生產和研究中的應用存在諸多不利。目前，已有大量實驗數據證實無血清培養基不僅能避免或改善含血清培養基所帶來的上述缺陷，也能獲得良好的培養效果并維持原有生物學功能。干細胞盡量含量甚微，但廣泛分布于哺乳動物的各個組織器官，這些組織或器官包括但不局限于骨髓、臍帶、脂肪組織、腦組織、視網膜、心臟、肝臟、肺以及皮膚等。大量研究表明，這些低含量的干細胞可在體外通過適當的方法進行進一步擴增，最常規的一種培養干細胞的培養基就是添加有胎牛血清的培養基。

發明內容

本發明提供一種克服上述問題或者至少部分地解決上述問題的干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法，該干細胞培養基能更快速擴增不同來源的干細胞，讓細胞的擴增速度提高3-5倍，但又不影響其分化的潛能，同時延長了傳代次數，而且又能很好的保持干細胞的潛能性。

根據本發明實施例的第一個方面，提供一種干細胞培養基，包括基礎細胞培養基和添加物組成；

所述基礎培養基中包括注射用水或者同級別的超純水，碳水化合物、氨基酸、維生素、甲殼素、殼聚糖、無機鹽及微量元素；還包括脂類及前體，核苷、細胞生長因子及轉鐵蛋白，還原劑、保護劑和誘導劑；所述細胞生長因子包括人表皮生長因子hEGF、甲狀腺素、腎上腺素、胰島素中的一種或者多種；

所述添加物為乙醇胺、丁酸鈉、食品添加劑和亞硒酸鈉；所述乙醇胺的終濃度為9.88-10.12mg/L，所述丁酸鈉的終濃度為9.73-10.27mg/L，所述轉鐵蛋白的終濃度為1.86-2.14mg/L。

作為優選的于，所述碳水化合物為葡萄糖、半乳糖、果糖、谷氨酰胺或丙酸銅。

作為優選的于，所述維生素是終濃度為0.2mg/L的生物素、2.46-2.71mg/L的葉酸、0.25-0.35mg/L的核黃素、2.18-2.36mg/L的泛酸鈣、8.77-9.14mg/L的氯化膽堿、12.39-12.81mg/L的肌醇、1.92-2.12mg/L的煙酰胺、0.88-1.12mg/L的維生素B6以及0.56-0.80mg/L的維生素B12。