[發明專利]干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法

在審

• 申請號: 201910122725.0
• 申請日: 2019-02-19
• 公開（公告）號: CN109777765A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 冷毅斌;吳亭
• 申請（專利權）人: 武漢普諾賽生命科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/079
• 代理公司: 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 王振宇

1.一種干細胞培養基，其特征在于，包括基礎細胞培養基和添加物組成；

所述基礎培養基中包括注射用水或者同級別的超純水，碳水化合物、氨基酸、維生素、甲殼素、殼聚糖、無機鹽及微量元素；還包括脂類及前體，核苷、細胞生長因子及轉鐵蛋白，還原劑、保護劑和誘導劑；所述細胞生長因子包括人表皮生長因子hEGF、甲狀腺素、腎上腺素、胰島素中的一種或者多種；

所述添加物為乙醇胺、丁酸鈉、食品添加劑和亞硒酸鈉；所述乙醇胺的終濃度為9.88-10.12mg/L，所述丁酸鈉的終濃度為9.73-10.27mg/L，所述轉鐵蛋白的終濃度為1.86-2.14mg/L。

2.根據權利要求1所述的干細胞培養基，其特征在于，所述碳水化合物為葡萄糖、半乳糖、果糖、谷氨酰胺或丙酸銅。

3.根據權利要求1所述的干細胞培養基，其特征在于，所述維生素是終濃度為0.2mg/L的生物素、2.46-2.71mg/L的葉酸、0.25-0.35mg/L的核黃素、2.18-2.36mg/L的泛酸鈣、8.77-9.14mg/L的氯化膽堿、12.39-12.81mg/L的肌醇、1.92-2.12mg/L的煙酰胺、0.88-1.12mg/L的維生素B6以及0.56-0.80mg/L的維生素B12。

4.根據權利要求1所述的干細胞培養基，其特征在于，所述無機鹽包括Na⁺、K⁺、Ca²⁺、Mg²⁺、Cl^–、HPO₄^2–、H₂PO₄^–和HCO₃^–；微量元素包括鐵、銅、鋅、硒和錳。

5.根據權利要求1所述的干細胞培養基，其特征在于，所述還原劑為還原型谷胱甘肽或巰基乙醇；所述保護劑為Pluronic F68、甲基纖維素或聚乙烯醇；所述誘導劑為丁酸鈉。

6.一種干細胞培養基的干細胞培養方法，其特征在于，包括：

在基礎培養基中加入500ml的注射用水或者同級別的超純水，并加入碳水化合物、氨基酸、維生素、甲殼素、殼聚糖、無機鹽及微量元素；還包括脂類及前體，核苷、細胞生長因子及轉鐵蛋白，還原劑、保護劑和誘導劑；得到基礎培養基；

在基礎培養基中依次加入終濃度為9.88-10.12mg/L的乙醇胺、終濃度為9.73-10.27mg/L的丁酸鈉、終濃度為1.86-2.14mg/L食品添加劑和亞硒酸鈉；將配置好的培養基避光保存在4℃的冰箱中。

7.一種干細胞培養基的應用，其特征在于，所述培養基在誘導人間充質干細胞分化為角膜上皮細胞中的應用。