[發明專利]NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201910122186.0
• 申請日: 2019-02-19
• 公開（公告）號: CN109738626B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 陳國鋒;景晟
• 申請（專利權）人: 復星診斷科技(上海)有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 陳亮

本發明涉及NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒及其制備方法，該試劑盒由試劑R1、試劑R2、校準品及質控品組成，試劑R1包括緩沖液、抗干擾劑、增敏劑、電解質、防腐劑，試劑R2包括連有NGAL抗體的膠乳微球、緩沖液、穩定劑、防腐劑。與現有技術相比，本發明R1試劑中抗干擾劑的使用，顯著提高了其抗干擾能力，擴大了中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白測定試劑盒的適用人群，同時本發明提高的試劑盒檢測還具有靈敏度高、特異性強、試劑盒穩定性好，可高效檢測尿液、血漿、血清中的NGAL含量，并且檢測結果與進口試劑相關良好。

技術領域

本發明涉及生化技術領域，特別涉及一種靈敏度高、特異性強的膠乳免疫比濁法中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白檢測試劑盒的制備方法。

背景技術

人類中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(neutrophil gelatinase-associatedlipocalin，NGAL)分子量約25kDa，共價結合于中性粒細胞明膠酶。NGAL生理狀態下是一種生長因子，主要參與了早期腎臟上皮的發生、生長。在正常組織包括腎臟、肺、胃及結腸的上皮組織中表達量較低。而急性腎功能損傷過程中NGAL水平偏高，能直接從尿液和血液中檢測出來，預后將發展成為急性腎功能衰竭。急性腎損傷(AKI)是一種發病率和死亡率均較高的疾病，由于該病發病機理不明，并且缺乏準確可靠的早期診斷標志物。研究證明，誘導AKI后約2h就能在尿中檢測到NGAL，而檢測出血肌酐的明顯改變要3-4天。另外，兒童心臟手術后發生急性腎衰的患者在手術后2h的血、尿NGAL濃度明顯升高，而血肌酐明顯升高則在1-3d后，NGAL的測定對AKI的早期診斷更加有力，能比傳統的腎損傷標志物更靈敏的反應出腎功能狀況。

目前市場上NGAL檢測方法有酶免疫法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)、乳膠增強透射免疫比濁法等，但是ELISA和RIA檢測法存在操作繁瑣，檢測時間長；普通透射比濁法存在靈敏度不夠；而乳膠增強透射免疫比濁法也存在抗干擾能力弱，特殊血樣如乳糜血樣等，部分試劑盒甚至能測出負值，不能很好反應特殊體質病人腎功能情況。

因此，需要在以往NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒的制備基礎上進行改良，以提高NGAL膠乳免疫比濁法試劑的抗干擾能力，擴大適應人群。

中國專利CN102662064A公開了檢測中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的免疫比濁試劑盒及制備方法，應用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶放置于盒體內，應用液瓶中裝有應用液，其組分：表面活性劑0.01％～1％，防腐劑0.01～0.5％，氯化鈉1％～20％，緩沖液20～200mmol/L；抗體懸浮液瓶中裝有包被中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白單克隆抗體的乳膠懸液，其組分：包被中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白單克隆抗體的乳膠0.05％～0.5％，表面活性劑0.01％～1％，防腐劑0.01～0.5％，緩沖液20～200mmol/L；標準品瓶中裝有中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白標準品。實現在生化儀上大批量定量檢測。但該方法生產的試劑在抗干擾方面表現不足，無法準確測量特殊體質的病人健康狀況。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白膠乳免疫比濁法檢測試劑盒及其制備方法，該方法制備的試劑盒具有抗干擾能力強可適用檢測不同體質病人血樣，特別是能準確測定含干擾因子較多的特殊血樣。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白膠乳免疫比濁測定試劑盒，由試劑R1、試劑R2、校準品及質控品組成，

所述試劑R1包括緩沖液、抗干擾劑、增敏劑、電解質、防腐劑，

所述試劑R2包括連有NGAL抗體的膠乳微球、緩沖液、穩定劑、防腐劑。

所述抗干擾劑由表面活性劑聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚醚與曲拉通按且在試劑R1中緩沖液中質量比為1:1-5:1復配得到。