[發明專利]NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201910122186.0
• 申請日: 2019-02-19
• 公開（公告）號: CN109738626B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 陳國鋒;景晟
• 申請（專利權）人: 復星診斷科技(上海)有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 陳亮

1.NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒由試劑R1、試劑R2、校準品及質控品組成，

所述試劑R1包括緩沖液、抗干擾劑、增敏劑、電解質、防腐劑，所述抗干擾劑由表面活性劑聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚醚與曲拉通按質量比為1:1-5:1復配得到；

所述試劑R2包括連有NGAL抗體的膠乳微球、緩沖液、穩定劑、防腐劑；

所述聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚醚選自聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段聚醚L61、F68或F108中一種或多種，在試劑R1中緩沖液中質量含量為0.2%-0.8%；

所述曲拉通包括曲拉通X-100或曲拉通X-45中一種或多種，在試劑R1中緩沖液中質量含量為0.15%-0.6%。

2.根據權利要求1所述的NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒，其特征在于，試劑R1中，

所述緩沖液包括但不限于磷酸鹽緩沖液、HEPES緩沖液、MES緩沖液或MOPS緩沖液，濃度為25-150mM，pH值為6.5-9.0，

所述增敏劑為聚乙二醇6000、聚乙二醇8000或聚乙二醇20000中的一種或多種，在試劑R1中緩沖液中質量含量為0.5%-10%，

所述電解質為氯化鈉，在試劑R1中緩沖液中質量含量為0.5%-5%，

所述防腐劑為疊氮化鈉或Proclin300中的一種或兩種，在試劑R1中緩沖液中質量含量為0.02%-2%。

3.根據權利要求1所述的NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒，其特征在于，試劑R2中，

所述連有NGAL抗體的膠乳微球為NGAL單抗或多抗連接在聚苯乙烯羧基微球，膠乳微球的直徑為100-300nm，在試劑R2中緩沖液中質量含量為0.1%～5%，

所述緩沖液液選自磷酸鹽緩沖液（PBS）、三羥甲基氨基甲烷緩沖液（Tris）、3-（N-嗎啉基）丙磺酸緩沖液（Mops）、2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖液（MES）、硼酸鹽緩沖液或甘氨酸緩沖液或羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖液中的一種或多種，pH值為6.5-9.0，

所述穩定劑為甘露醇、牛血清白蛋白、海藻糖中的一種或多種，在試劑R2中緩沖液中質量含量為0.5%-5%，

所述防腐劑為疊氮化鈉或Proclin300中的一種或兩種，在試劑R2中緩沖液中質量含量為0.02%-2%。

4.根據權利要求1所述的NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑R1與所述試劑R2的體積比為3:1。

5.根據權利要求1所述的NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒，其特征在于，所述校準品為重組或天然NGAL蛋白。

6.根據權利要求1所述的NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒，其特征在于，所述質控品為重組或天然NGAL蛋白。

7.如權利要求1-6中任一項所述的NGAL膠乳免疫比濁法檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，該方法采用以下步驟：

I、試劑R1制備：

取純化水，依次加入緩沖液、抗干擾劑、增敏劑、電解質、防腐劑，每次添加物料需要攪拌至完全溶解，調節pH值至6.5-9.0，并用0.22μm濾膜進行過濾；

II、試劑R2制備：

（1）活化聚苯乙烯膠乳微球：在膠乳微球中加入1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，20℃-25℃混合活化30min；

（2）偶聯抗體：將中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白抗體加入已活化的聚苯乙烯膠乳微球中，20℃-25℃反應2h進行共價偶聯；

（3）洗滌除去未偶聯成功的抗體：得到的膠乳微球反應液離心去掉上清，除去游離抗體、小分子雜質；

（4）封閉微球上未偶聯抗體的羧基位點：得到的膠乳微球中加入牛血清白蛋白，封閉1h；

（5）混合與保存：使用含穩定劑、防腐劑、緩沖液的R2稀釋液，將步驟（4）獲得的溶液稀釋3~15倍，最終得到試劑R2，于4℃保存；

III、校準品及質控品制備：將天然或重組NGAL蛋白用凍干稀釋液進行稀釋至目標濃度，進行凍干，于4℃保存；

VI、組成試劑盒：

將上述制備的試劑R1和試劑R2按體積比R1：R2=3:1分裝入瓶，與校準品及質控品組成試劑盒。