[發明專利]一種基于孔板技術的紅曲霉分離純化方法在審
| 申請號： | 201910116434.0 | 申請日： | 2019-02-15 |
| 公開（公告）號： | CN109593660A | 公開（公告）日： | 2019-04-09 |
| 發明（設計）人： | 倪莉;周康熙;劉志彬;張雯;張晨 | 申請（專利權）人： | 福州大學 |
| 主分類號： | C12N1/14 | 分類號： | C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645 |
| 代理公司： | 福州元創專利商標代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡學俊;饒文君 |
| 地址： | 350108 福建省福州市閩*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 紅曲霉 孔板 分離純化 六孔板 工作效率 實驗周期 形態各異 培養基 傳統的 菌落 點樣 復檢 擴培 酸醇 搖瓶 雜菌 米粉 工作量 微生物 生長 | ||
1.一種基于孔板技術的紅曲霉分離純化方法，其特征在于：將0.5~2.0g待分離樣品分別加至每孔裝有20~30mL液體酸醇米粉培養基的深六孔板中進行紅曲霉擴培，30℃、200r/min擴培3d后在無菌超凈臺內各取100uL樣品在PDA上進行涂布，30℃培養5d后挑取形態各異的菌落在含有鑒定培養基的24孔板中進行點樣復檢，最后將復檢后的紅曲霉菌株在PDA斜面培養基上劃線培養后4℃保藏。
2.根據權利要求1所述的一種基于孔板技術的紅曲霉分離純化方法，其特征在于：所述液體酸醇米粉培養基的具體配置方法為：無水葡萄糖5~15g、過40目的秈米粉15~30g、乳酸8~12mL，加去離子水定容至950mL，121℃滅菌20min；滅菌后再在無菌超凈臺中加入50mL無水乙醇，混勻，待用。
3.根據權利要求1所述的一種基于孔板技術的紅曲霉分離純化方法，其特征在于：所述PDA培養基的具體配置方法為：馬鈴薯削皮切塊，取200g塊狀馬鈴薯加蒸餾水800mL沸水蒸煮20~30min，用八層紗布過濾殘渣，取濾液加20g葡萄糖和17~20g瓊脂，煮沸冷卻后定容至1L,121℃20min滅菌。
4.根據權利要求1所述的一種基于孔板技術的紅曲霉分離純化方法，其特征在于：菌落的復檢方法為：在24孔板中加入鑒定培養基，每孔1.5mL，24個孔共四行六列，一至四行培養基分別為CYA、G25N、MEA、PDA培養基。
5.根據權利要求4所述的一種基于孔板技術的紅曲霉分離純化方法，其特征在于：CYA培養基的配置方法為：硝酸鈉3g、磷酸氫二鉀1g、氯化鉀0.5g、七水合硫酸鎂0.5g、七水合硫酸亞鐵0.01g、酵母提取粉5.0g、蔗糖30g、17~20g瓊脂，定容至1L后121℃20min滅菌。
6.根據權利要求4所述的一種基于孔板技術的紅曲霉分離純化方法，其特征在于：G25N培養基的配置方法為：CYA培養基中加入25wt.%的甘油。
7.根據權利要求4所述的一種基于孔板技術的紅曲霉分離純化方法，其特征在于：MEA培養基的配置方法為：酵母提取粉20g、蛋白胨10g、葡萄糖20g、17~20g瓊脂，定容至1L后121℃20min滅菌。
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