[發明專利]一種基于sp2/0細胞永生化改良的雜交瘤技術在審
| 申請號： | 201910109205.6 | 申請日： | 2019-02-05 |
| 公開（公告）號： | CN109913500A | 公開（公告）日： | 2019-06-21 |
| 發明（設計）人： | 翁炳煥;楊昊堃 | 申請（專利權）人： | 翁炳煥 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 317300 浙江省臺*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 瘤細胞 永生化 細胞永生化 雜交瘤技術 融合細胞 改良 擴增 重組逆轉錄病毒載體 細胞貼壁生長 陽性克隆細胞 細胞成活率 細胞死亡率 雜交瘤細胞 傳代培養 導入雜交 克隆篩選 生物領域 細胞融合 細胞篩選 致病基因 重組載體 融合 產業化 轉染 成功率 匯合 | ||
1.一種基于sp2/0細胞永生化改良的雜交瘤技術，其特征在于，將具有hTERT永生化基因的重組逆轉錄病毒載體轉染鼠sp2/0細胞，經PM和HAT篩選獲得永生化改良、更適合于體外無限傳代和被植入外源基因擴增的質粒包裝sp2/0細胞，為產業擴增全致病基因組奠定基礎。
2.根據權利要求1所述的一種基于sp2/0細胞永生化改良的雜交瘤技術，其特征在于，所述重組逆轉錄病毒載體為pcDNA3.1-hTERT。
3.根據權利要求1、2所述的一種基于sp2/0細胞永生化改良的雜交瘤技術，其特征在于，所述逆轉錄病毒載體包括pCDNA3.1、pCMV、pSV-neo、pEF。
4.根據權利要求1所述的一種基于sp2/0細胞永生化改良的雜交瘤技術，其特征在于，所述包裝sp2/0細胞的篩選使用2～4ug/ml PM。
5.根據權利要求1、4所述的一種基于sp2/0細胞永生化改良的雜交瘤技術，其特征在于，所述包裝sp2/0細胞的篩選使用3ug/ml PM。
6.根據權利要求1所述的一種基于sp2/0細胞永生化改良的雜交瘤技術，其特征在于，所述PM和HAT篩選指以10%胎牛血清配制同時含HAT和PM的篩選應用液，包括含PM濃度為2μg/ml、HAT濃度為1×的甲液， PM濃度為3μg/ml、HAT濃度為1×的乙液， PM濃度為4μg/ml、HAT濃度為1×的丙液， PM濃度為5μg/ml、HAT濃度為1×的丁液，然后在96孔板的第1和2排、第3和4排、第5和6排、第7和8排中分別以200μl/孔的甲液、乙液、丙液和丁液進行篩選，每5天更換篩選液1次。
7.根據權利要求1所述的一種基于sp2/0細胞永生化改良的雜交瘤技術，其特征在于，所述轉染鼠sp2/0細胞指以標準磷酸鈣沉淀法轉染至對數生長期的鼠sp2/0細胞。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于翁炳煥，未經翁炳煥許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201910109205.6/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
