[發明專利]DNA提取試劑、DNA的提取方法及DNA提取試劑盒

有效

• 申請號: 201910107329.0
• 申請日: 2019-02-02
• 公開（公告）號: CN109797148B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 何筠;張琦文;田暉
• 申請（專利權）人: 深圳清華大學研究院;安序源生物科技（深圳）有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 潘霞

本發明涉及一種DNA提取試劑、DNA的提取方法及DNA提取試劑盒。該DNA提取試劑包括裂解液及除雜劑，裂解液包括終濃度為1M～5M的異硫氰酸胍、終濃度為0.01M～0.2M的Tris?HCl和最終質量體積百分數為1％～10％的N?月桂酰肌氨酸；除雜劑包括交聯聚乙烯基吡咯烷酮及聚乙烯基吡咯烷酮中的至少一種。上述DNA提取試劑中的裂解液與除雜劑能夠相互配合，能夠減少DNA在提取制備過程中的降解，且提高DNA的純度，使用上述DNA提取試劑制備得到的DNA能夠滿足宏基因組測序的要求。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種DNA提取試劑、DNA的提取方法及DNA提取試劑盒。

背景技術

人類健康與人體表面及器官中微生物的數量及種類存在著密切關系，尤其是腸道微生物，在人類健康方面扮演著重要角色。近年來的大量研究發現了人體腸道內的多種微生物在免疫、發育、炎癥、代謝疾病、精神障礙以及癌癥等疾病中發揮著重要作用，對腸道微生物群的研究可以幫助我們預防、診斷并最終治愈或抑制這類疾病。

糞便樣品作為腸道微生物研究來源之一，取樣方便且無創。但人類糞便復雜，存在纖維、微生物、未消化的顆粒、核酸酶和人體脫落細胞等，從糞便中去除纖維和未消化的顆粒比較困難，進而影響被分析的宏基因組DNA的總體質量和數量。此外，這些雜質的存在也影響微生物細胞的有效裂解。若樣品中微生物裂解不充分，會使高通量測序結果出現偏差，最終影響被測樣品中微生物多樣性。因此，糞便中的DNA的提取對揭示腸道菌群多樣性至關重要。

目前進行宏基因組測序研究時往往需要基因組完整、DNA的純度高。但是目前的商業提取試劑盒和傳統的酚氯仿抽提法均有其缺陷，例如目前的商業提取試劑盒大部分為柱提取法，離心過濾時產生剪切力會使DNA降解嚴重，DNA產量低，難以達到宏基因組測序要求，且成本高；傳統的酚氯仿抽提法得到的DNA純度較低，影響后續PCR、高通量測序等。

發明內容

基于此，有必要提供一種能夠減少DNA降解且提高DNA純度的DNA提取試劑。

一種DNA提取試劑，包括裂解液及除雜劑，所述裂解液包括終濃度為1M～5M的異硫氰酸胍、終濃度為0.01M～0.2M Tris-HCl和最終質量體積百分數為1％～10％的N-月桂酰肌氨酸；所述除雜劑包括交聯聚乙烯基吡咯烷酮及聚乙烯基吡咯烷酮中的至少一種。

上述DNA提取試劑中的裂解液與除雜劑能夠相互配合，能夠減少DNA在提取制備過程中的降解，且提高制備得到的DNA的純度，制備得到的DNA能夠滿足宏基因組測序的要求。

此外，還提供一種能夠減少DNA降解且提高DNA的純度的DNA提取試劑盒及DNA提取方法。

一種DNA提取試劑盒，包括上述DNA提取試劑。

一種DNA的提取方法，包括以下步驟：

用裂解液裂解樣本，得到待純化液，所述裂解液包括終濃度為1M～5M的異硫氰酸胍、終濃度為0.01M～0.2M Tris-HCl和最終質量體積百分數為1％～10％的N-月桂酰肌氨酸；及

用除雜劑處理所述待純化液，得到DNA粗產物，其中，所述除雜劑包括交聯聚乙烯基吡咯烷酮及聚乙烯基吡咯烷酮中的至少一種。

附圖說明

圖1為實施例1及實施例2的電泳圖；

圖2為實施例3的電泳圖；

圖3為實施例4的電泳圖；

圖4為實施例5的電泳圖。

具體實施方式

為了便于理解本發明，下面將參照相關附圖對本發明進行更全面的描述。附圖中給出了本發明的部分實施例。但是，本發明可以以許多不同的形式來實現，并不限于本文所描述的實施例。相反地，提供這些實施例的目的是使本發明公開內容更加透徹全面。