[發(fā)明專利]一種甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導(dǎo)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910103125.X
• 申請日: 2019-02-01
• 公開（公告）號: CN109644873B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李純佳;李旭娟;字秋艷;劉新龍;劉洪博;林秀琴;徐超華;陸鑫;毛鈞
• 申請（專利權(quán)）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 陳左;于洪

本發(fā)明涉及一種甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導(dǎo)方法，屬于甘蔗組培研究技術(shù)領(lǐng)域。該方法以蔗株頂生幼葉為外植體，經(jīng)啟動培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)，獲得胚性愈傷，并在光誘導(dǎo)條件下產(chǎn)生大量胚性細胞團。本發(fā)明提供的甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導(dǎo)方法，主要包括外植體的選擇、接種、啟動培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和光誘導(dǎo)，可一次性大量獲得具有極強分化再生能力的胚性細胞團，有效解決了以往甘蔗熱帶種材料胚性細胞團獲取困難的問題，可為相關(guān)科研和生產(chǎn)提供一種簡易、高效、可靠的胚性細胞團來源。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于甘蔗組培研究技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導(dǎo)方法。

背景技術(shù)

甘蔗熱帶種（Saccharum officinarum）是現(xiàn)代栽培品種（Saccharum Hybrid）的原始親本，具有較為原始和簡單的基因組結(jié)構(gòu)，科研上作為甘蔗遺傳學(xué)研究的便利材料而具有重要科研價值；同時具有大莖、高糖分、低纖維的農(nóng)藝特征，生產(chǎn)上作為果蔗品種而具有重要經(jīng)濟價值。胚性細胞團是植物離體培養(yǎng)中產(chǎn)生的、由大量胚性細胞組成的團塊，具有極強的全能性和分化能力。在分子遺傳學(xué)研究方面，胚性細胞團是最為理想的外源基因受體；在組培快繁等實際應(yīng)用方面，胚性細胞團具有遠超一般愈傷的增殖分化能力和遺傳穩(wěn)定性。建立一套輕簡高效的熱帶種胚性細胞團誘導(dǎo)技術(shù)體系，不僅可為相關(guān)基礎(chǔ)科研提供便利，還有利于提高果蔗組培繁種育苗效率，具有重要的現(xiàn)實價值。

目前，我國對甘蔗胚性細胞團誘導(dǎo)研究還僅限于少數(shù)栽培品種。經(jīng)研究人員努力，新臺糖16號、22號，以及桂糖21號、28號等甘蔗栽培品種先后成功誘導(dǎo)獲得胚性細胞團，建立了較為成熟的栽培品種胚性細胞團誘導(dǎo)技術(shù)體系。出乎意料的是，長期研究過程中發(fā)現(xiàn)，按照現(xiàn)有體系進行甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導(dǎo)，幾乎完全無法實現(xiàn)。這表明，熱帶種與現(xiàn)代甘蔗品種間已經(jīng)具有了極其顯著的遺傳分化，對于誘導(dǎo)體系產(chǎn)生了截然不同的反應(yīng)。因此，有必要開發(fā)一套專門適用于熱帶種的胚性細胞團誘導(dǎo)技術(shù)體系。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導(dǎo)方法，該方法包括外植體取材、外植體接種與啟動培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)誘導(dǎo)胚性愈傷、光誘導(dǎo)胚性細胞團產(chǎn)生等步驟，實現(xiàn)了甘蔗熱帶種胚性細胞團的高效誘導(dǎo)。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導(dǎo)方法，包括如下步驟：

步驟（1），外植體取材：

選擇8-10月齡甘蔗熱帶種健康茁壯蔗株，取其頂端肥厚帶以上葉鞘，剝除外層老葉，酒精消毒后剝?nèi)∽顑?nèi)層3片幼葉作為外植體；

步驟（2），外植體接種與啟動培養(yǎng)：

將步驟（1）所得外植體切為單層葉塊，葉背向上接種于啟動培養(yǎng)基，28℃黑暗培養(yǎng)2-3周，得到愈傷組織；

所述的啟動培養(yǎng)基為MS+2,4-D 3.0mg/L+復(fù)酞核酸 1.0mg/L+蔗糖 15.0g/L+瓊脂粉 5.0g/L，pH為5.8-5.9；

步驟（3），繼代培養(yǎng)誘導(dǎo)胚性愈傷：

將步驟（2）得到的愈傷組織切成小塊后，接種于繼代培養(yǎng)基，28℃黑暗培養(yǎng)2-3周后可轉(zhuǎn)化為胚性愈傷；

所述的繼代培養(yǎng)基為MS+2,4-D 1.5mg/L+復(fù)酞核酸 0.5mg/L+蔗糖45.0g/L+瓊脂粉 5.0g/L，pH為5.8-5.9；

步驟（4），光誘導(dǎo)胚性細胞團產(chǎn)生：

將步驟（3）所得胚性愈傷轉(zhuǎn)移至光誘導(dǎo)培養(yǎng)基，28℃光照培養(yǎng)2-3周后胚性愈傷表面產(chǎn)生大量胚性細胞團；

所述的光誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2,4-D 1.0mg/L+復(fù)酞核酸 1.0mg/L+蔗糖20.0g/L+瓊脂粉 5.0g/L，pH為5.8-5.9。