[發(fā)明專利]一種甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910103125.X | 申請日： | 2019-02-01 |
| 公開（公告）號： | CN109644873B | 公開（公告）日： | 2021-11-09 |
| 發(fā)明（設計）人： | 李純佳;李旭娟;字秋艷;劉新龍;劉洪博;林秀琴;徐超華;陸鑫;毛鈞 | 申請（專利權）人： | 云南省農業(yè)科學院甘蔗研究所 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 昆明正原專利商標代理有限公司 53100 | 代理人： | 陳左;于洪 |
| 地址： | 661699 云*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 甘蔗 熱帶 種胚性 細胞 誘導 方法 | ||
1.一種甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟（1），外植體取材：
選擇8-10月齡甘蔗熱帶種健康茁壯蔗株，取其頂端肥厚帶以上葉鞘，剝除外層老葉，酒精消毒后剝取最內層3片幼葉作為外植體；
步驟（2），外植體接種與啟動培養(yǎng)：
將步驟（1）所得外植體切為單層葉塊，葉背向上接種于啟動培養(yǎng)基，28℃黑暗培養(yǎng)2-3周，得到愈傷組織；
所述的啟動培養(yǎng)基為MS+2,4-D 3.0mg/L+復酞核酸 1.0mg/L+蔗糖 15.0g/L+瓊脂粉5.0g/L，pH為5.8-5.9；
步驟（3），繼代培養(yǎng)誘導胚性愈傷：
將步驟（2）得到的愈傷組織切成小塊后，接種于繼代培養(yǎng)基，28℃黑暗培養(yǎng)2-3周后可轉化為胚性愈傷；
所述的繼代培養(yǎng)基為MS+2,4-D 1.5mg/L+復酞核酸 0.5mg/L+蔗糖45.0g/L+瓊脂粉5.0g/L，pH為5.8-5.9；
步驟（4），光誘導胚性細胞團產生：
將步驟（3）所得胚性愈傷轉移至光誘導培養(yǎng)基，28℃光照培養(yǎng)2-3周后胚性愈傷表面產生大量胚性細胞團；
所述的光誘導培養(yǎng)基為MS+2,4-D 1.0mg/L+復酞核酸 1.0mg/L+蔗糖20.0g/L+瓊脂粉5.0g/L，pH為5.8-5.9；
步驟（4）中，光照培養(yǎng)條件為：使用紅藍色LED光源，波長分別為660nm、450nm，紅藍光比例為1:1-3:1，總光量子通量密度為300-800μmol/m2·s，日光照時長12-16h，黑暗時長8-12h。
2.根據權利要求1所述的甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導方法，其特征在于，步驟（1）中，選取8-10月齡蔗株頂端生長點以上10 cm區(qū)段內最內層3片幼葉作為外植體。
3.根據權利要求1所述的甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導方法，其特征在于，步驟（1）中，選取8-10月齡蔗株頂端生長點以上3-8cm區(qū)段內最內層3片幼葉作為外植體。
4.根據權利要求1所述的甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導方法，其特征在于，步驟（2）中，葉塊寬為2-4mm，長為4-6mm。
5.根據權利要求1所述的甘蔗熱帶種胚性細胞團誘導方法，其特征在于，步驟（3）中，愈傷組織切成2-5mm見方的小塊。
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