[發明專利]化學發光法檢測心型脂肪酸結合蛋白試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 201910099809.7
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN111505303A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 焉麗波;王立杰;艾冰花;常青俠;趙京超;陳蒙蒙
• 申請（專利權）人: 艾維可生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 深圳盛德大業知識產權代理事務所(普通合伙) 44333
• 代理人: 賈振勇

本發明適用于生物技術領域，具體涉及一種化學發光法檢測心型脂肪酸結合蛋白的檢測試劑盒，其特征在于，包括包被有抗H?FABP單克隆抗體的發光板、辣根過氧化物酶標記的檢測用抗H?FABP單克隆抗體溶液、標準品、樣本稀釋液、標準品稀釋液、濃縮洗滌液、發光液A、發光液B以及檢測抗體稀釋液。本發明實施例提供的化學發光法檢測心型脂肪酸結合蛋白的檢測試劑盒，準確性高，靈敏度好；均一性良好，穩定性高；特異性好；可實現對臨床血清樣本中H?FABP的快速定量檢測，以作為對AMI病人發病早期簡便而快速的排除性篩選，操作簡單，無污染。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種化學發光法檢測心型脂肪酸結合蛋白試劑盒及使用方法。

背景技術

急性心肌梗死(AMI)是臨床的常見急危重癥。AMI通常發病突然且發展迅速，早發現、早治療對縮小梗死面積，保護心臟功能有重大意義，可以說是挽救患者生命、提高患者預后的關鍵所在。1999年ESC和ACC聯合建議將檢測到心肌標志物的異常變化作為診斷AMI急性發病的必要條件。目前臨床常用的生化檢測指標是cTnI和CK-MB，然而它們釋放到血中的時間較晚，因此，作為AMI的早期診斷并不理想。近年來由于心肌型脂肪酸結合蛋白(H-FABP)在血液中出現早，特異性高，已成為國內外關注的早期診斷AM I的生化指標之一。

H-FABP是一種重要的細胞內脂肪酸結合蛋白，大量地存在于心肌組織中，是可溶性蛋白質，其分子量小，僅為15KDa，當心肌細胞受損時可快速釋放到血液中，在AMI早期(0～3h)即可檢測到高水平的血清H-FABP。當心肌細胞缺血、缺氧時，動員脂肪酸的利用供能，導致心肌細胞內H-FABP迅速升高，由于H-FABP分子量小，可快速釋放入血。急性心肌梗死后心力衰竭可導致血漿H-FABP水平增高，且增高程度與心力衰竭程度呈正比，因此H-FABP不僅僅是心肌損傷的早期指標，也可作為評價心功能的指標。

H-FABP水平檢測對AMI的早期診斷具有較高的靈敏性和特異性，而且在判定嚴重程度、預后評估及療效判斷等方面均有一定的臨床價值。由于H-FABP是一種無酶活性的蛋白質，其定性檢測與定量檢測都需要借助免疫學方法。從最早的放射免疫法到最近的乳膠微粒增強免疫比濁法以及膠體金免疫技術在H-FABP測定中的應用，H-FABP的臨床檢測經歷了一個檢測速度越來越快，檢測靈敏度也越來越高的發展過程。

有關FABP定量檢測的最早報道是Ockner等于1974年在研究I-FABP時采用的放射免疫法，在這一測定方法中，Ockner等首先通過凝膠過濾柱層析及等電聚焦電泳獲得純化的I-FABP，然后用純化I-FABP免疫家兔以獲得I-FABP抗血清并用14C進行放射性標記，14C標記抗血清與待測標本反應后，通過測定免疫沉淀中放射性比活度來檢測相應I-FABP的濃度。Ockner等報道的方法準備過程及測定過程都較為繁瑣，價格昂貴且存在放射性污染，在臨床檢測中缺乏實用價值，但為FABP測定方法的改進奠定了基礎。

單克隆抗體的出現及酶聯免疫測定法(ELISA)的建立極大地推動了FABP測定方法的改進。Ockner之后，許多研究者在制備了各型FABP單克隆抗體的基礎上，報道了多種基于ELISA原理的FABP測定方法，這些方法無放射性污染，操作較為簡便快速，測定時間介于2～16h之間，結果的穩定性及重復性較好，有較大的應用價值。特別是1997年Wodzig等報道的一步法ELISA檢測FABP，操作尤為簡捷，整個測定過程僅需45min，應用較廣。