[發明專利]化學發光法檢測心型脂肪酸結合蛋白試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 201910099809.7
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN111505303A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 焉麗波;王立杰;艾冰花;常青俠;趙京超;陳蒙蒙
• 申請（專利權）人: 艾維可生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 深圳盛德大業知識產權代理事務所(普通合伙) 44333
• 代理人: 賈振勇

1.一種化學發光法檢測心型脂肪酸結合蛋白的檢測試劑盒，其特征在于，包括包被有抗H-FABP單克隆抗體的發光板、辣根過氧化物酶標記的檢測用抗H-FABP單克隆抗體溶液、標準品、樣本稀釋液、標準品稀釋液、濃縮洗滌液、發光液A、發光液B以及檢測抗體稀釋液。

2.如權利要求1所述的化學發光法定量檢測心型脂肪酸結合蛋白的檢測試劑盒，其特征在于，所述包被有被抗H-FABP單克隆抗體的發光板通過如下方法制得：

將包被有抗H-FABP單克隆抗體溶于緩沖液中，至包被有抗H-FABP單克隆抗體的濃度為2mg/mL，得到混合液；

將所述混合液加入微孔板的孔中，每孔0.1mL，加蓋板膜，2-8℃放置18-24小時，用洗滌液洗滌5次；

向每孔中加入封閉液，每孔0.12mL，在2-8℃放置18-24小時，用洗滌液洗滌5次；

置25-35℃干燥間內，濕度40％，干燥時間20-24小時，鋁箔袋封裝板子，2～8℃保存，即得；

所述緩沖液是100mmol/L、PH＝9.6的碳酸鹽緩沖液；

所述封閉液的溶劑是20mmol/L、pH＝7.4的碳酸鹽緩沖液，溶質及其在所述封閉液中的濃度如下：質量分數3％的牛血清白蛋白，質量分數0.5％的酪蛋白，質量分數8％的蔗糖，150mmol/L的NaCl，質量分數0.1％的防腐劑Proclin-300。

3.如權利要求1所述的化學發光法定量檢測心型脂肪酸結合蛋白的檢測試劑盒，其特征在于，辣根過氧化物酶標記的檢測用抗H-FABP單克隆抗體溶液通過如下方法制得：

抗H-FABP單克隆抗體純化、定量后，在0.01mol/L、pH＝9.0-9.5的碳酸鹽緩沖溶液中透析，得到終濃度約為5mg/mL的抗H-FABP單克隆抗體溶液；

取辣根過氧化物酶溶解于水，制得終濃度為5mg/mL的辣根過氧化物酶水溶液；

向所述辣根過氧化物酶水溶液中加入NaIO₄，NaIO₄的濃度為37.5mg/mL，室溫避光攪拌20min，得到氧化后的酶液；

所述氧化后的酶液在1mmol/L、pH＝4.4的醋酸鹽緩沖液中、4℃透析過夜，換液3次；

取出透析袋中溶液，加入0.2mol/L的Na₂CO₃緩沖溶液，調至pH＝9.0-9.5，并迅速與所述抗H-FABP單克隆抗體溶液按照體積比1:1混合，室溫避光輕微攪拌2h；

加入新配的6mg/mL NaBH₄溶液100ul，混勻，4℃反應2h，于0.15mol/L、pH＝7.4碳酸鹽緩沖溶液中、4℃透析過夜，換液3次；

加入牛血清白蛋白使牛血清白蛋白終濃度為2-3mg/mL，在轉速為10000rpm下混合3min，收集上清，分裝凍存，即得。

4.如權利要求1所述的化學發光法定量檢測心型脂肪酸結合蛋白的檢測試劑盒，其特征在于，所述標準品為H-FABP抗原。

5.如權利要求1所述的化學發光法定量檢測心型脂肪酸結合蛋白的檢測試劑盒，其特征在于，所述樣本稀釋液的溶劑是20mmol/L、pH＝6.0的碳酸鹽緩沖溶液，溶質及其在所述樣本稀釋液中的濃度如下：0.2％的明膠、0.2％的酪蛋白、150mmol/L的NaCl、0.01％的Tween-20、5％的蔗糖、0.5/萬的溴鉀酚紫以及0.1％的防腐劑Proclin-300。

6.如權利要求1所述的化學發光法定量檢測心型脂肪酸結合蛋白的檢測試劑盒，其特征在于，濃縮洗滌液的組成的溶劑是水，溶質及其在所述濃縮洗滌液中的濃度如下：29g/L的Na₂HPO₄·12H₂O、2.96g/L的NaH₂PO₄·2H₂O、234g/L的NaCl、20mL/L的吐溫20。