[發明專利]一種檢測口蹄疫病毒3AB抗體的試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201910096803.4
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN109765366A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 陳豪泰;張永光;孫躍峰;祁林林;張杰;潘麗
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N33/58;G01N33/68;G01N21/78
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種檢測口蹄疫病毒3AB抗體的試劑盒及其檢測方法，涉及酶聯免疫技術領域，所述試劑盒包括酶標板和酶標二抗；所述酶標板經口蹄疫病毒3AB蛋白包被。本發明提供的試劑盒檢測口蹄疫病毒3AB的抗體，具有高效、靈敏特異性和重復性均良好的優點，該方法操作簡便、快速、成本低廉，可以在室溫下可視化檢測，適合于在臨床應用中進行推廣，為口蹄疫病毒3AB抗體的快速檢測提供可靠的技術手段。

技術領域

本發明涉及酶聯免疫技術領域，具體涉及一種檢測口蹄疫病毒3AB抗體的試劑盒及其檢測方法。

背景技術

口蹄疫是一種由口蹄疫病毒(FMDV)所致的急性的、熱性的、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄獸，經常在羊、牛、豬等動物中傳播。發病時易感動物的唇和蹄部出現水皰，同時伴有發燒、食欲不振等癥狀，患病動物體重和產奶量大幅下降?？谔阋卟《疽淄ㄟ^空氣傳播，傳染性強，流行快速，易感動物在抵抗力較弱的情況下也會導致死亡，給養殖戶造成巨大的經濟損失，嚴重阻礙了養殖業的發展。

目前對于口蹄疫病毒3AB抗體的診斷方法和疫苗免疫效果的評價方法只能在實驗室完成，不適合基層檢測，需要建立更為靈敏、快捷和簡便的可視化的檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測口蹄疫病毒3AB抗體的試劑盒及其檢測方法。本發明提供的試劑盒能夠簡便、快速及準確檢測口蹄疫病毒3AB抗體，無需借助實驗室的儀器和設備，更加適合基層檢測。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種檢測口蹄疫病毒3AB抗體的試劑盒，包括酶標板和酶標二抗；所述酶標板經口蹄疫病毒3AB蛋白包被。

優選地，所述口蹄疫病毒3AB蛋白的包被濃度為1～2μg/mL。

優選地，所述試劑盒還包括洗滌液、血清稀釋液、底物顯色液、終止液、標準陽性血清和標準陰性血清。

優選地，所述洗滌液包括磷酸鹽緩沖液，所述磷酸鹽緩沖液中含有質量分數為0.03～0.08％的吐溫-20，所述磷酸鹽緩沖液的pH值為7.2。

優選地，所述血清稀釋液包括磷酸鹽緩沖液，所述緩沖液中含有脫脂奶粉，所述脫脂奶粉的濃度為45～55g/L。

優選地，所述底物顯色液包括TMB溶液。

優選地，所述所述終止液包括SDS溶液或硫酸溶液。

優選地，所述酶標二抗包括豬的酶標二抗或牛的酶標二抗。

本發明還提供了上述技術方案所述的試劑盒非診斷目的地檢測口蹄疫病毒3AB抗體的方法，包括以下步驟：

1)將所述血清稀釋液以體積比1:40稀釋血清樣本，得到稀釋血清；

2)向所述酶標板的孔中加入步驟1)得到的稀釋血清，在15～30℃下孵育0.5～1.5h，棄去孔中的液體，洗滌液洗滌、拍干，得到第一拍干酶標板；

3)向步驟2)得到的第一拍干酶標板的孔中加入稀釋后的酶標二抗，在15～30℃下孵育0.5～1.5h，棄去孔中液體，洗滌液洗滌、拍干，得到第二拍干酶標板；

4)向步驟3)得到的第二拍干酶標板的孔中加入底物顯色液，在15～30℃下避光顯色15～25min，當孔中的顏色為藍色時，檢測到口蹄疫病毒3AB抗體，當孔中的顏色為無色時，未檢測到口蹄疫病毒3AB抗體。

優選地，所述酶標二抗經磷酸鹽緩沖液稀釋20000倍后，加入孔中。

本發明提供了一種檢測口蹄疫病毒3AB抗體的試劑盒，包括酶標板和酶標二抗；所述酶標板經口蹄疫病毒3AB蛋白包被。在本發明中，當動物感染口蹄疫病毒以后，產生3AB抗體，通過檢測3AB抗體來達到檢測目的。