[發(fā)明專利]一種人NT-proBNP特異性重組羊單克隆抗體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910096758.2
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN109678958B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐淞;胡川閩;秦意力;范舒;普秀瓊;劉靜;艾海燕
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶探生科技有限公司
• 主分類號: C07K16/26
• 分類號: C07K16/26;C12N15/13;G01N33/74;G01N33/577
• 代理公司: 重慶志合專利事務(wù)所(普通合伙) 50210
• 代理人: 胡榮琿

1.一種人NT-proBNP特異性重組羊單克隆抗體，其特征在于，所述人NT-proBNP特異性重組羊單克隆抗體包括羊單鏈抗體scFv和人IgG的Fc段，羊單鏈抗體scFv連接人IgG的Fc段；其中，所述人IgG的Fc段的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述羊單鏈抗體scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.編碼權(quán)利要求1所述的羊單鏈抗體scFv的基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因，其中，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

4.一種表達(dá)載體，其特征在于，該表達(dá)載體包括權(quán)利要求2或3所述的基因。

5.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，該宿主細(xì)胞含有權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體。

6.權(quán)利要求1所述的羊單克隆抗體、權(quán)利要求2或3所述的基因、權(quán)利要求4所述的載體或權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞在制備用于檢測人NT-proBNP的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

7.權(quán)利要求1所述的羊單克隆抗體、權(quán)利要求2或3所述的基因、權(quán)利要求4所述的載體或權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞在制備用于診斷心力衰竭的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

8.一種人NT-proBNP免疫檢測用試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括權(quán)利要求1所述的人NT-proBNP特異性重組羊單克隆抗體。

9.一種非診斷目的檢測樣本中人NT-proBNP的方法，其特征在于，該方法包括使用權(quán)利要求1所述的人NT-proBNP特異性重組羊單克隆抗體對樣本進行雙抗體夾心ELISA檢測。

10.一種人NT-proBNP特異性重組羊單克隆抗體的制備方法，該方法包括：

（1）將人NT-proBNP中的B細(xì)胞表位肽和BSA偶聯(lián)，將偶聯(lián)產(chǎn)物免疫羊，之后分離羊脾細(xì)胞，提取總RNA，并反轉(zhuǎn)錄制備cDNA；

（2）以cDNA為模板，擴增羊IgG輕鏈和重鏈可變區(qū)基因，然后將二者連接，獲得羊單鏈抗體編碼基因；

（3）將步驟（2）獲得的羊單鏈抗體編碼基因插入噬菌粒載體中，構(gòu)建免疫抗體庫；通過噬菌體展示和抗原特異性淘選，獲得特異性結(jié)合人NT-proBNP的羊單鏈抗體scFv；

（4）將編碼所述羊單鏈抗體scFv的DNA片段連接人IgG Fc段編碼片段后亞克隆入真核表達(dá)載體中，構(gòu)建重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞表達(dá)，獲得所述人NT-proBNP特異性重組羊單克隆抗體；

所述步驟（1）中B細(xì)胞表位肽的氨基酸序列為SEQ ID NO：6。