[發明專利]基于輔酶A適配體的電化學生物傳感器的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201910096691.2
• 申請日: 2019-01-21
• 公開（公告）號: CN109932408B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 胡宇芳;胡丹丹;張青青;馬少華;王邃;郭智勇
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.基于輔酶A適配體的電化學生物傳感器，其特征在于，其通過如下方法制備獲得：

Electrode 1的制備：

將直徑為2mm的金電極在麂皮上用三氧化二鋁粉末拋光2～5min，拋光后將電極置于超聲清洗器中用二次蒸餾水中超聲清洗2～5min，然后用N₂吹干，取CoA適配體溶液，80～90℃下加熱5～10min，然后逐漸冷卻至室溫，滴涂于電極表面，在4℃冰箱孵育過夜，蒸餾水緩緩沖洗電極，采用巰基己醇MCH處理30～60min，置換電極表面非Au-S鍵固定的CoA適配體，蒸餾水緩緩沖洗電極，標記為Electrode 1；CoA適配體溶液用量為2～5μL，濃度為0.1～0.5μM；

巰基己醇MCH用量為2～5μL，濃度為0.5～1.0mM；

Electrode 2的制備：

依次取Ac-CoA，多肽，HAT p300，加H₂O至總體積2～5μL；攪拌器上劇烈攪拌2～5min至混合均勻，然后移至溫度為32～40℃的水浴鍋中孵育1～3h，稀釋10倍備用；取2～5μL乙?；磻旱瓮坑贓lectrode 1表面，在32～40℃孵育30～60min，而后蒸餾水緩緩沖洗電極，標記為Electrode 2；

Ac-CoA用量為0.1～1μL，濃度為0.1～1mM；

多肽用量為0.1～1μL，濃度為0.1～1mM；

HAT p300用量為0.1～1μL，濃度為0.01～500nM；

Electrode 3的制備：

取Exo I溶液滴涂于Electrode 2表面，在室溫下孵育30～120min，而后蒸餾水緩緩沖洗電極，再滴加2～10μL TdT反應液，標記為Electrode 3；

Exo I溶液用量為2～5μL，濃度為0.5～1.0U/μL；

TdT反應液組成為：1～5μL 5×TdT緩沖液，dCTP，TdT；其中dCTP用量為1～3μL，濃度為5～10mM；

TdT用量為1～3μL，濃度為5～10U/mL；

Electrode 4的制備：

向Electrode 3電極表面滴加Ag⁺，室溫孵育15～30min，蒸餾水緩緩沖洗電極，再向電極表面滴加硼氫化鈉溶液NaBH₄，室溫下避光反應15～30min，蒸餾水緩緩沖洗電極，標記為Electrode 4；即得所述基于輔酶A適配體的電化學生物傳感器；

Ag⁺用量為2～5μL，濃度為1～3μM；

硼氫化鈉溶液NaBH₄用量為2～5μL，濃度為1～3μM。

2.根據權利要求1所述的基于輔酶A適配體的電化學生物傳感器，其特征在于：所用CoA適配體序列結構為5’-3’：GGGCACGAGCGAAGGGCATAAGCTGACGAAAGTCAGACAAGACATGGTGCCC。