[發明專利]一種葫蘆的組培快繁方法

在審

• 申請號: 201910095750.4
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN109566420A
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 繆倩;程兆榜;任春梅;季英華;楊柳
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種葫蘆組培快繁方法，涉及植物組織培養技術領域。本發明所述方法包括以下步驟：1)將去殼的葫蘆種子消毒，接種到無菌苗固體培養基表面進行無菌苗培養，得無菌苗；2)剝離所述無菌苗的子葉節，將所述子葉節接種于叢生芽誘導培養基中進行誘導培養，得叢生芽；3)分離所述叢生芽后接種于生根培養基中進行生根培養，得葫蘆組培快繁苗。利用本發明所述方法，2個月內獲得大量遺傳性狀一致的葫蘆成苗；同時增殖系數最高達2.27，生根率最高達95％。本發明所述方法為葫蘆的細胞工程和轉基因改良育種提供了方法基礎，同時為規模化生產高品質葫蘆砧木苗提供參考。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種葫蘆的組培快繁方法。

背景技術

植物組織培養是一種快速有效的生物工程育種手段，不受季節和地區的限制。植物組織培養又叫離體培養，無菌條件下分離植物組織和器官，在人工控制的條件下進行離體培養，得到成熟的愈傷組織，經過再分化獲得再生完整植株。由細胞全能性可知植物的任何組織和器官在一定條件下都可以長成為完整的植株。但是這些離體組織細胞全能性有許多差異，甚至是同一組織器官的不同部位也不一定相同。除此以外，基因型、苗齡、培養基、培養條件等因素控制或影響植物細胞狀態，決定培養的效果和結果。

葫蘆(Lagenaria siceraria Standl.)屬于雙子葉植物綱葫蘆科葫蘆屬，在我國南北各地都有種植，一年生攀援草本植物。它是世界上最古老的作物之一，葫蘆的果實、葉子和藤蔓在成熟前可作蔬菜使用，具有消腫利尿，清熱解暑作用；成熟后的果實表皮木質化嚴重變得堅硬，可作裝飾和容器使用；此外中醫發現葫蘆可用來治療黃疸，潤肺止咳?，F代農業生產中，葫蘆被廣泛應用于西瓜、南瓜、黃瓜等瓜類蔬菜作物的嫁接砧木，嫁接苗可以提高接穗的抗蟲抗病性，保質保產。嫁接技術發展越來越成熟，葫蘆砧木普及應用，砧木的抗性強弱直接影響果實的品質。運用生物工程技術培育高抗優良的葫蘆新品種是瓜類蔬菜生產的發展方向。然而常規傳統育種方式周期長，無法維持優良性狀代代穩定遺傳，進程慢，很難滿足生產的需求。

到目前為止，葫蘆組織培養工作研究欠缺，沒有一個完善的離體再生體系，制約著轉基因技術在葫蘆遺傳改良育種方面的應用。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種葫蘆的組培快繁方法，可以克服常規育種繁瑣周期長效率低的缺點，為葫蘆的細胞工程和轉基因改良育種提供了方法基礎；且操作簡單，生產成本低，應用價值高，出苗多又快，為規模化生產高品質葫蘆砧木苗提供參考。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種葫蘆的組培快繁方法，包括以下步驟：1)將去殼的葫蘆種子消毒，接種到無菌苗固體培養基中進行無菌苗培養，得無菌苗；所述無菌苗固體培養基以MS培養基為基本培養基，還包括以下質量百分比的組分：0.4～0.8％的瓊脂和2～4％的蔗糖，pH值為5.8；所述無菌苗培養包括暗培養2～4d后轉入光照培養；

2)剝離所述無菌苗的子葉節，將所述子葉節接種于叢生芽誘導培養基中進行誘導培養，得叢生芽；所述叢生芽誘導培養基以MS為基本培養基，還包括：1～4mg/L的6-BA、0.1～0.4mg/L的ZT、分別占所述叢生芽誘導培養基質量0.4～0.8％的瓊脂和2～4％的蔗糖，pH值為5.8；

3)分離所述叢生芽后接種于生根培養基中進行生根培養，得葫蘆組培快繁苗；所述生根培養基以1/2MS為基本培養基，還包括：0.1～0.3mg/L的IBA、分別占所述生根培養基質量0.4～0.8％的瓊脂和2～4％的蔗糖，pH值為5.8。

優選的，步驟1)所述消毒包括依次進行的第一消毒和第二消毒；所述第一消毒為將所述去殼的葫蘆種子用體積分數為70～80％乙醇水溶液浸泡70～90s；所述第二消毒為將第一消毒后的種子用質量分數為8～12％的次氯酸鈉水溶液消毒10～15min。