[發(fā)明專利]血液中檢測lnc_ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910095386.1
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN109652553A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 康寧;朱桂芳;曹秀峰
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇萬成生物醫(yī)學(xué)研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 南京眾聯(lián)專利代理有限公司 32206
• 代理人: 葉涓涓

1.一種血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應(yīng)用，所述lnc_ENST00000319426.3分子標(biāo)志物的核苷酸序列為SEQ ID NO.1。

2. 如權(quán)利要求1所述的血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應(yīng)用，其特征在于：用于胃癌診斷的試劑為實時定量PCR試劑盒。

3.如權(quán)利要求1或2所述的一種血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應(yīng)用，其特征在于：根據(jù)核苷酸序列為SEQ ID NO.1的lnc_ ENST00000319426.3分子標(biāo)志物設(shè)計了2對引物用于檢測該序列，引物核苷酸序列為SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQID NO.4、SEQ ID NO.5。

4.如權(quán)利要求1所述的一種血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應(yīng)用，其特征在于：lnc_ ENST00000319426.3分子標(biāo)志物的檢測方法，包括樣品總RNA提取、芯片表達(dá)譜及生物信息學(xué)分析、cDNA合成、qRT-PCR-實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)、數(shù)據(jù)分析。

5.如權(quán)利要求4所述的一種血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應(yīng)用，其特征在于：具體步驟包括，第一步，血漿總RNA提取，血漿、血清總RNA提取使用mirVana PARIS Kit試劑盒提取，組織總RNA提取Trizol法提取組織及細(xì)胞總RNA；第二步，芯片表達(dá)譜及生物信息學(xué)分析，將GC和正常人血漿樣本，經(jīng)CapitalBio Technology HumanLncRNA Array v4 and mRNA Array v2技術(shù)，檢測外周血中的lncRNA和mRNA表達(dá)譜，用GeneSpring software V13.0 (Agilent)對芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，當(dāng)兩組樣本中mRNA或lncRNA表達(dá)差異倍數(shù)≥2，且 p value≤0.05 時，定義為差異基因；對差異表達(dá)mRNAs及表達(dá)差異lncRNAs共表達(dá)mRNAs進(jìn)行疾病分析、GO分析及Pathway分析，預(yù)測lncRNA的功能；第三步，cDNA合成, Takara RR047A (Prime ScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser)兩步法逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)試劑盒; 第四步，qRT-PCR-實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng), 對組織和血清中l(wèi)nc RNA測定采用ABI7500熒光定量PCR儀，使用Takara SYBR? Premix Ex TagTM ⅡDRR081A熒光定量PCR試劑盒，并根據(jù)溶解曲線判斷引物反應(yīng)的特異性，采用ΔCT以及 2?ΔΔCT法對目的lncRNA進(jìn)行表達(dá)量和相對表達(dá)量分析；第五步，數(shù)據(jù)分析，組織、血漿或血清間lncRNA差異性分析根據(jù)需要采用以下統(tǒng)計分析方法：配對t檢驗，Mann-Whitney,Wilcoxon, χ2,以及Kruskal-Wallis 檢驗；漿lnc RNA表達(dá)水平和臨床病理資料之間相關(guān)分析采用卡方檢驗；受試者特征曲線（Receiver-operating- characteristic, ROC）和曲線下面積（area under the ROC curves, AUC)用來評估血漿lncRNA診斷GC效能；所有統(tǒng)計分析均采用SPSS20.0統(tǒng)計分析軟件，p＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

6. 一種用于胃癌分期診斷的實時定量PCR檢測試劑盒，其特征在于：包括核苷酸序列為SEQ ID NO.1的lnc_ ENST00000319426.3分子標(biāo)志物的設(shè)計并合成出特異性用于實時定量 PCR的檢測引物。

7.如權(quán)利要求7所述的檢測試劑盒，其特征在于：采用的特異性引物如序列表中SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5。

8.一種核苷酸序列為SEQ ID NO.1的lnc_ ENST00000319426.3分子標(biāo)志物。