[發明專利]血液中檢測lnc_ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應用

在審

• 申請號: 201910095386.1
• 申請日: 2019-01-31
• 公開（公告）號: CN109652553A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 康寧;朱桂芳;曹秀峰
• 申請（專利權）人: 江蘇萬成生物醫學研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 葉涓涓

1.一種血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應用，所述lnc_ENST00000319426.3分子標志物的核苷酸序列為SEQ ID NO.1。

2. 如權利要求1所述的血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應用，其特征在于：用于胃癌診斷的試劑為實時定量PCR試劑盒。

3.如權利要求1或2所述的一種血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應用，其特征在于：根據核苷酸序列為SEQ ID NO.1的lnc_ ENST00000319426.3分子標志物設計了2對引物用于檢測該序列，引物核苷酸序列為SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQID NO.4、SEQ ID NO.5。

4.如權利要求1所述的一種血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應用，其特征在于：lnc_ ENST00000319426.3分子標志物的檢測方法，包括樣品總RNA提取、芯片表達譜及生物信息學分析、cDNA合成、qRT-PCR-實時熒光定量聚合酶鏈反應、數據分析。

5.如權利要求4所述的一種血液中檢測lnc_ ENST00000319426.3在診斷胃癌分期中的應用，其特征在于：具體步驟包括，第一步，血漿總RNA提取，血漿、血清總RNA提取使用mirVana PARIS Kit試劑盒提取，組織總RNA提取Trizol法提取組織及細胞總RNA；第二步，芯片表達譜及生物信息學分析，將GC和正常人血漿樣本，經CapitalBio Technology HumanLncRNA Array v4 and mRNA Array v2技術，檢測外周血中的lncRNA和mRNA表達譜，用GeneSpring software V13.0 (Agilent)對芯片數據進行分析，當兩組樣本中mRNA或lncRNA表達差異倍數≥2，且 p value≤0.05 時，定義為差異基因；對差異表達mRNAs及表達差異lncRNAs共表達mRNAs進行疾病分析、GO分析及Pathway分析，預測lncRNA的功能；第三步，cDNA合成, Takara RR047A (Prime ScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser)兩步法逆轉錄反應試劑盒; 第四步，qRT-PCR-實時熒光定量聚合酶鏈反應, 對組織和血清中lnc RNA測定采用ABI7500熒光定量PCR儀，使用Takara SYBR? Premix Ex TagTM ⅡDRR081A熒光定量PCR試劑盒，并根據溶解曲線判斷引物反應的特異性，采用ΔCT以及 2?ΔΔCT法對目的lncRNA進行表達量和相對表達量分析；第五步，數據分析，組織、血漿或血清間lncRNA差異性分析根據需要采用以下統計分析方法：配對t檢驗，Mann-Whitney,Wilcoxon, χ2,以及Kruskal-Wallis 檢驗；漿lnc RNA表達水平和臨床病理資料之間相關分析采用卡方檢驗；受試者特征曲線（Receiver-operating- characteristic, ROC）和曲線下面積（area under the ROC curves, AUC)用來評估血漿lncRNA診斷GC效能；所有統計分析均采用SPSS20.0統計分析軟件，p＜0.05 為差異具有統計學意義。

6. 一種用于胃癌分期診斷的實時定量PCR檢測試劑盒，其特征在于：包括核苷酸序列為SEQ ID NO.1的lnc_ ENST00000319426.3分子標志物的設計并合成出特異性用于實時定量 PCR的檢測引物。

7.如權利要求7所述的檢測試劑盒，其特征在于：采用的特異性引物如序列表中SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.5。

8.一種核苷酸序列為SEQ ID NO.1的lnc_ ENST00000319426.3分子標志物。