[發(fā)明專利]一種羅漢果葫蘆二烯醇合酶突變體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910095354.1
• 申請日: 2019-01-30
• 公開（公告）號: CN110066785B
• 公開（公告）日: 2021-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬小軍;喬晶;羅祖良;石宏武;崔晟榕;廖晶晶
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所
• 主分類號: C12N9/90
• 分類號: C12N9/90;C12N15/61;C12N15/81;C12N1/19;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/34
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛

1.一種羅漢果葫蘆二烯醇合酶突變體，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.編碼權(quán)利要求1所述的羅漢果葫蘆二烯醇合酶突變體的基因，核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

3.一種包含如權(quán)利要求2所述的基因的重組載體。

4.攜帶權(quán)利要求2所述基因或權(quán)利要求3所述重組載體的重組表達菌株。

5.一種制備權(quán)利要求4所述重組表達菌株的方法，其特征在于，是在如SEQ ID NO.3所示的野生型羅漢果葫蘆二烯醇合酶基因序列的基礎(chǔ)上，將其編碼的第50位精氨酸突變成賴氨酸，得到突變基因，將含有突變基因的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到宿主菌中即得到重組菌株。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法具體是:

（1）以含有SEQ ID NO.3所示核酸序列的質(zhì)粒為模板，將能表達出第50位賴氨酸的基因序列記為50K，以序列ATTGTTGCAAGTTCATAAAGCTAAAAAAGCTTTTCATGATGATAGA為所述50K基因的正向引物50K-F，以序列TCTATCATCATGAAAAGCTTTTTTAGCTTTATGAACTTGCAACAAT為所述50K基因的反向引物50K-R，進行PCR擴增，獲得重組質(zhì)粒；

（2）將上一步得到的重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到E.coli DH5α感受態(tài)細胞中；

（3）提取E.coli DH5α感受態(tài)細胞中的重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入到表達菌株，獲得重組表達菌株。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟（1）所述質(zhì)粒為pCEV-G4-Km質(zhì)粒。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟（3）所述重組表達菌株為重組酵母菌株BY4742-SgCS-50K。

9.權(quán)利要求1所述的羅漢果葫蘆二烯醇合酶突變體在提高葫蘆二烯醇的產(chǎn)量上的應(yīng)用。