[發(fā)明專利]一種高效合成鳥(niǎo)苷二磷酸巖藻糖的重組枯草芽孢桿菌及其構(gòu)建方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910093694.0
• 申請(qǐng)日: 2019-01-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109749976B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉龍;鄧潔瑩;陳春梅;呂雪芹;李江華;堵國(guó)成;陳堅(jiān)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 光明乳業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/54;C12N15/75;C12P19/18;C12P19/02;C12R1/125
• 代理公司: 北京東正專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11312
• 代理人: 蔡仲德

1.一種高效合成鳥(niǎo)苷二磷酸巖藻糖的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述重組枯草芽孢桿菌是通過(guò)在枯草芽孢桿菌168的基因組中強(qiáng)化表達(dá)鳥(niǎo)苷酸激酶和核苷二磷酸激酶基因，并表達(dá)外源巖藻糖激酶和磷酸鳥(niǎo)嘌呤基轉(zhuǎn)移酶基因得到的，其中，所述巖藻糖激酶和磷酸鳥(niǎo)嘌呤基轉(zhuǎn)移酶基因?yàn)閬?lái)源于脆弱擬桿菌的fkp基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效合成鳥(niǎo)苷二磷酸巖藻糖的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，將P43啟動(dòng)子替換枯草芽孢桿菌168中鳥(niǎo)苷酸激酶和核苷二磷酸激酶基因的啟動(dòng)子，來(lái)強(qiáng)化表達(dá)鳥(niǎo)苷酸激酶和核苷二磷酸激酶基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高效合成鳥(niǎo)苷二磷酸巖藻糖的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述鳥(niǎo)苷酸激酶基因如NCBI上Gene ID: 938821基因所示，核苷二磷酸激酶如NCBI上Gene ID:938997基因所示。

4.一種權(quán)利要求1所述的高效合成鳥(niǎo)苷二磷酸巖藻糖的重組枯草芽孢桿菌的構(gòu)建方法，其特征在于，該構(gòu)建方法包括以下步驟：

（1）構(gòu)建包含鳥(niǎo)苷酸激酶和核苷二磷酸激酶基因的上下游序列、P43啟動(dòng)子和壯觀霉素抗性基因序列的替換框，將構(gòu)建好的替換框轉(zhuǎn)化重組枯草芽孢桿菌168，通過(guò)驗(yàn)證，確認(rèn)鳥(niǎo)苷酸激酶和核苷二磷酸激酶強(qiáng)化表達(dá)成功，得到重組枯草芽孢桿菌BSGN，所述替換框的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

（2）構(gòu)建包含巖藻糖激酶和磷酸鳥(niǎo)嘌呤基轉(zhuǎn)移酶基因的重組質(zhì)粒，將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化枯草芽孢桿菌BSGN，通過(guò)驗(yàn)證，確認(rèn)巖藻糖激酶和磷酸鳥(niǎo)嘌呤基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)成功，得到重組枯草芽孢桿菌BSGNF。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高效合成鳥(niǎo)苷二磷酸巖藻糖的重組枯草芽孢桿菌的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟（1）中，將構(gòu)建好的替換框電轉(zhuǎn)化枯草芽孢桿菌168的感受態(tài)細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高效合成鳥(niǎo)苷二磷酸巖藻糖的重組枯草芽孢桿菌的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟（2）中，重組質(zhì)粒的序列如SEQ ID NO.3所示。

7.權(quán)利要求1所述的高效合成鳥(niǎo)苷二磷酸巖藻糖的重組枯草芽孢桿菌的應(yīng)用，其特征在于，使用所述重組枯草芽孢桿菌發(fā)酵生成鳥(niǎo)苷二磷酸巖藻糖。