[發(fā)明專利]一種以Fe3O4@Au為信號放大器檢測天蠶素B的方法

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• 申請日: 2019-01-30
• 公開（公告）號: CN109765386A
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘇秀霞;劉歡;彭正華;張婧;張海寧;徐佳;晏春苗;胡金龍
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西科技大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 徐文權(quán)

本發(fā)明公開了一種以Fe₃O₄@Au納米粒子為信號放大器檢測天蠶素B的方法，包括以下步驟：1)對上下玻片進(jìn)行酸處理；2)將上玻片浸泡在DMOAP中，再沖洗后吹干；同時(shí)將下玻片浸泡TEA/DMOAP中，然后沖洗后吹干；3)將天蠶素B抗體溶液滴加到下玻片表面，并溫育，再沖洗后吹干；4)將待檢測的Fe₃O₄@Au復(fù)合的天蠶素B溶液滴加到下玻片上，再溫育，然后沖洗后吹干；5)將上玻片放置于下玻片上，之間填充液晶5CB形成的液晶池，然后觀察液晶池光學(xué)信號的顏色及亮度。該方法能夠?qū)崿F(xiàn)天蠶素B的檢測，且檢測成本低，檢測靈敏度高，受客觀環(huán)境影響較小，且檢測速度快。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于抗菌肽檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種以Fe₃O₄@Au為信號放大器檢測天蠶素B的方法。

背景技術(shù)

Fe₃O₄@Au復(fù)合納米微粒是納米級別的Fe₃O₄和Au形成的復(fù)合材料，以Fe₃O₄納米微粒為核，Au納米微粒包覆在Fe₃O₄納米微粒周圍形成Fe₃O₄-Au核殼結(jié)構(gòu)，又被稱為金磁復(fù)合微粒。其具有超順磁性、良好的生物相容性及低毒性等優(yōu)點(diǎn)，因此經(jīng)常被應(yīng)用于磁性靶向藥物輸送、生物分離、傳感器、磁共振成像、抗體標(biāo)記等領(lǐng)域。崔亞麗等在2001年首次合成了Fe₃O₄@Au復(fù)合納米微粒，首先在水溶液中合成Fe₃O₄納米微粒，將合成的Fe₃O₄納米微粒作為“種子”加入到Au³⁺溶液中，以羥胺還原Au³⁺形成Au包覆的Fe₃O₄@Au復(fù)合納米微粒。Jon等制備了一種PEG修飾的核殼Fe₃O₄@Au復(fù)合納米微粒，并且發(fā)現(xiàn)其對生物細(xì)胞無毒副性，更加適應(yīng)于生物體內(nèi)檢測。

天蠶素是最早被發(fā)現(xiàn)和研究的一種陽離子抗菌肽。天蠶素B(CB)對革蘭氏陽性菌、部分革蘭氏陰性菌均具有很強(qiáng)的殺傷力，而對真菌和真核細(xì)胞沒有毒，而在動植物抗病基因工程、植物育種、生物飼料添加劑等領(lǐng)域有著巨大的潛在應(yīng)用價(jià)值。

然而，現(xiàn)有的檢測手段，現(xiàn)有多肽檢測方法有電位滴定法、高效液相色譜法等，電位滴定法滴定終點(diǎn)難以判定，且受客觀環(huán)境影響大；高效液相色譜法的分析成本高，耗時(shí)長。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種以Fe₃O₄@Au為信號放大器檢測天蠶素B的裝置及檢測方法，能夠?qū)崿F(xiàn)天蠶素B的檢測，且檢測成本低，檢測靈敏度高，受客觀環(huán)境影響較小，且檢測速度快。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種以Fe₃O₄@Au為信號放大器檢測天蠶素B的方法，包括以下步驟：

1)取上玻片及下玻片，將上玻片及下玻片進(jìn)行酸處理，使其表面產(chǎn)生羥基，然后沖洗后吹干；

2)將上玻片浸入DMOAP水溶液中進(jìn)行浸泡，再沖洗后吹干；同時(shí)將下玻片放置于含TEM和DMOAP的乙醇溶液中浸泡，然后沖洗后吹干；

3)將天蠶素B抗體溶液滴加到下玻片表面，并放置在28℃-40℃的溫度下溫育，再沖洗后吹干；

4)將Fe₃O₄@Au和天蠶素B的復(fù)合溶液滴加到下玻片上，再放置于28℃-40℃的溫度下溫育，然后沖洗后吹干；