[發(fā)明專利]一種三分子熒光互補蛋白質(zhì)作用感受器表達系統(tǒng)及其制備方法與應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910093006.0 | 申請日： | 2019-01-30 |
| 公開（公告）號： | CN109735569B | 公開（公告）日： | 2023-03-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李學義;彭曉欣;王曉龍 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海交通大學 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;G01N33/68 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 許亦琳;余明偉 |
| 地址： | 200240 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 分子 熒光 互補 蛋白質(zhì) 作用 感受器 表達 系統(tǒng) 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種三分子熒光互補蛋白質(zhì)作用感受器表達系統(tǒng)，其特征在于，所述表達系統(tǒng)至少包括：第一目標基因元件-第二目標基因元件-監(jiān)測器元件，所述第一目標基因元件用于表達第一目標基因，所述第一目標基因元件包括GFP?11-第一目標序列，所述第二目標基因元件用于表達第二目標基因，所述第二目標基因元件包括GFP?10-第二目標序列，所述監(jiān)測器元件用于將第一目標基因和第二目標基因在同一驅(qū)動子控制下表達，所述監(jiān)測器元件包括IRES-GFP?1-9，所述GFP?11、GFP?10和GFP?1-9可分別拆分自GFP；
所述GFP?11的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
所述GFP?10的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；
所述GFP?1-9的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；
所述IRES的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；
所述第一目標基因元件通過自切割肽與所述第二目標基因元件相連，所述自切割肽選自P2A；
所述第一目標序列的5，端上設(shè)有連接序列1，所述連接序列1的核苷酸序列如SEQ IDNO：6所示；
所述第二目標序列的5，端上設(shè)有連接序列2，所述連接序列2的核苷酸序列如SEQ IDNO：7所示。
2.如權(quán)利要求1所述的三分子熒光互補蛋白質(zhì)作用感受器表達系統(tǒng)，其特征在于，所述自切割肽選自豬捷申病毒1。
3.如權(quán)利要求1所述的三分子熒光互補蛋白質(zhì)作用感受器表達系統(tǒng)，其特征在于，所述表達系統(tǒng)為干擾慢病毒載體。
4.如權(quán)利要求3所述的三分子熒光互補蛋白質(zhì)作用感受器表達系統(tǒng)，其特征在于，所述表達系統(tǒng)為pLenti表達載體。
5.如權(quán)利要求1-4任一所述的三分子熒光互補蛋白質(zhì)作用感受器表達系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，至少包括如下步驟：
采用基因合成的方式合成第一目標基因元件-第二目標基因元件；
構(gòu)建監(jiān)測器元件表達載體；
將第一目標基因元件-第二目標基因元件連接到所述監(jiān)測器元件表達載體上，形成第一目標基因元件-第二目標基因元件-監(jiān)測器元件表達系統(tǒng)。
6.如權(quán)利要求5所述的三分子熒光互補蛋白質(zhì)作用感受器表達系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，所述第一目標基因元件通過自切割肽與所述第二目標基因元件相連。
7.如權(quán)利要求1-4任一所述三分子熒光互補蛋白質(zhì)作用感受器表達系統(tǒng)或權(quán)利要求5-6任一所述的三分子熒光互補蛋白質(zhì)作用感受器表達系統(tǒng)的制備方法的用途，為用于檢測蛋白質(zhì)的相互作用。
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