[發明專利]中華鱉ZW性染色體型微創快速鑒定PCR引物組、位點、方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201910091887.2
• 申請日: 2019-01-30
• 公開（公告）號: CN109652563B
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發明（設計）人: 許曉軍;張海琪;朱凝瑜;孟慶輝
• 申請（專利權）人: 浙江省水產技術推廣總站
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 朱亞冠

1.一種中華鱉ZW性染色體型鑒定PCR引物組，其特征在于該引物組序列如下：

正向引物：5’-TGGTGCTGTRAAGAAGGMRRCT-3’，見SEQ ID No.1；

反向引物：5’-TTCTTCATCTTCCTCCTCRGGT-3’，見SEQ ID No.2。

2.一種微創快速鑒定中華鱉ZW性染色體型的分子方法，其特征在于利用權利要求1所述的引物對待檢中華鱉樣本進行PCR擴增，然后將擴增產物進行電泳檢測，當擴增產物出現2031bp大小的條帶時，中華鱉性染色體型為ZZ型，即遺傳學雄性；當擴增產物出現2031bp和1624bp大小的條帶時，中華鱉性染色體型為ZW型，即遺傳學雌性。

3.如權利要求2所述的一種微創快速鑒定中華鱉ZW性染色體型的分子方法，其特征在于PCR擴增反應體系為：

PCR擴增條件是：94℃預變性5min,94℃變性30s,62℃退火30s,72℃延伸100s，變性到延伸過程35個循環，最后72℃延伸5min。

4.一種微創快速鑒定中華鱉ZW性染色體型的分子方法，其特征在于

步驟(1)、采用PicoPure^TM DNA Extraction Kit的蛋白酶K進行樣本裂解：

樣本裂解體系包括中華鱉全血0.5-1μL，1ug/μL蛋白酶k溶液10-10.5μL；總體積為11μL；

步驟(2)、利用權利要求1所述的引物對步驟1樣本裂解混合液進行PCR擴增；

步驟(3)、待擴增完成后，將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳分離并凝膠成像，當擴增產物出現2031bp大小的條帶時，中華鱉性染色體型為ZZ型，即遺傳學雄性；當擴增產物出現2031bp和1624bp大小的條帶時，中華鱉性染色體型為ZW型，即遺傳學雌性。

5.如權利要求4所述的一種微創快速鑒定中華鱉ZW性染色體型的分子方法，其特征在于步驟(1)中華鱉全血的采樣方式包括以下兩種：

一是初孵稚鱉未脫落卵黃囊內存留微量血液；

二是稚鱉、成鱉后肢皮膚針刺微創采集微量血液。

6.如權利要求4所述的一種微創快速鑒定中華鱉ZW性染色體型的分子方法，其特征在于步驟(1)裂解條件為65℃裂解30min，95℃滅活10min。

7.如權利要求4所述的一種微創快速鑒定中華鱉ZW性染色體型的分子方法，其特征在于步驟(2)PCR擴增體系包括如下：

PCR擴增條件是：94℃預變性5min,94℃變性30s,62℃退火30s,72℃延伸100s，變性到延伸過程35個循環，最后72℃延伸5min。

8.一種中華鱉ZW性染色體型微創快速鑒定試劑盒，其特征在于包括SEQ ID No.1、SEQID No.2所示引物。

9.一種用于鑒定中華鱉ZW性染色體型的位點，其特征在于Z性染色體特異連鎖片段2031bp，序列見SEQ ID No.3；W性染色體特異連鎖片段1624bp，序列見SEQ ID No.4。