[發明專利]鱈魚皮寡肽及其分離純化方法和在制備ɑ-葡萄糖苷酶抑制劑及抗Ⅱ型糖尿病藥物中的應用

有效

• 申請號: 201910091803.5
• 申請日: 2019-01-30
• 公開（公告）號: CN109776652B
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 賈建萍;包國良;李青青
• 申請（專利權）人: 浙江省醫學科學院
• 主分類號: C07K5/087
• 分類號: C07K5/087;C07K7/06;C12P21/06;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/14;C07K1/36;A61K38/08;A61P3/10
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 朱朦琪

本發明公開了一種鱈魚皮寡肽及其分離純化方法和應用，該鱈魚皮寡肽的氨基酸序列分別為Glu?Gly?Gly?Tyr?Thr?Arg、Tyr?Val?Arg或Phe?Tyr?Glu。分離純化方法包括：以阿拉斯加狹鱈魚皮為原料，蛋白酶酶解法制備鱈魚皮膠原肽混合肽；再依次進行超濾處理、葡聚糖凝膠色譜柱粗分以及高效液相色譜分離；葡聚糖凝膠色譜柱由葡聚糖凝膠樹脂Sephadex G?25和葡聚糖凝膠樹脂Sephadex G?50串聯而成。經活性試驗發現，該三種鱈魚皮寡肽具有ɑ?葡萄糖苷酶抑制活性，能輔助降血糖，可用于制備抗Ⅱ型糖尿病藥物。

技術領域

本發明涉及魚皮寡肽的分離純化及應用領域，尤其涉及阿拉斯加狹鱈魚皮寡肽及其分離純化方法和在制備ɑ-葡萄糖苷酶抑制劑及抗Ⅱ型糖尿病藥物中的應用。

背景技術

阿拉斯加狹鱈魚。學名為Theragra chalcogramma，生活在大西洋北部，是一種冷水性深海魚類，肉質細嫩，肉味清淡，由于其長期的生長環境特殊(低溫、高壓)，其魚蛋白(魚肉、魚皮等)的氨基酸組成及氨基酸序列可能有別于其他的淺海魚及淡水魚等。

鱈魚皮膠原肽是以鱈魚皮為原料，利用酶法制得而成的一類蛋白質、多肽、寡肽和氨基酸的混合物(含量以寡肽為主)。其中的寡肽是一類氨基酸殘基數目在2～12個的小肽。

如申請公布號為CN 108530530 A的中國專利文獻中公開了一種鱈魚魚皮膠原肽的制備方法，包括：1)將魚皮除雜清洗后粉碎成漿，經酸洗、堿洗后再水洗至中性；2)將步驟1)處理后的魚皮加入熱水中保溫；3)將步驟2)得到的蛋白提取液中加入蛋白酶，經兩次酶解處理；4)將酶解后的漿液用離心機除去固體殘渣，所得清液經超濾膜去除少量大分子雜質，再用納濾膜去除無機鹽和小分子雜質并濃縮，得到魚皮膠原肽溶液，經噴霧干燥得到魚皮膠原肽粉末。

再如申請公布號為CN 104152518 A的中國專利文獻中公開了一種肝病輔食型鱈魚皮膠原蛋白肽的制備方法，包括：(1)鱈魚皮預處理；(2)酶解反應：加入胰蛋白酶酶解反應；(3)超濾得GM2組分；(4)DEAE-SepharoseFF離子交換層析分離得到GM2-2組分，冷凍干燥得到膠原蛋白酶。

但以上技術方案得到的膠原肽或膠原蛋白酶均屬于大分子肽或蛋白質，其分離方法不適用于鱈魚皮寡肽的分離純化。

分子量較小的鱈魚皮寡肽之間分子量較為接近，而且其他物性如帶電性、疏水性等差別不明顯，利用傳統膜分離方式或采用單一填料的層析分離法無法分離生物活性較高的組分。

目前已報道的魚皮寡肽的生物活性有抗氧化、降血糖、提高免疫功能等，如WANG等(WANG T Y,HSIEH C H,HUNG CC,et al.Fish skin gelatin hydrolysates asdipeptidyl peptidase IV inhibitors and glucagon-like peptide-1stimulatorsimprove glycaemic control in diabeticrats:a comparison between warm-and cold-water fish[J].)對比目魚和羅非魚的魚皮進行水解，經分離純化后得到一種二肽基肽酶，發現其可以促進胰高血糖素樣肽和胰島素的分泌，進而發揮調節血糖的作用。

糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，高血糖則是由于胰島素分泌缺陷或其生物作用受損，或兩者兼有引起。降糖藥按照降糖機理大致分為三種：(1)刺激胰島素的分泌或胰島素制劑，如磺脲類藥物；(2)增加外周組織對葡萄糖的利用，如雙胍類降糖藥；(3)ɑ-葡萄糖苷酶抑制劑，如臨床上常用的阿卡波糖等。

目前公開的具有降血糖功效的魚皮寡肽均是遵循機理(1)發揮調節血糖的作用，還未有公開其它的降糖機理。

發明內容