[發(fā)明專利]鱈魚(yú)皮寡肽及其分離純化方法和在制備ɑ-葡萄糖苷酶抑制劑及抗Ⅱ型糖尿病藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910091803.5
• 申請(qǐng)日: 2019-01-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109776652B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈建萍;包國(guó)良;李青青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K5/087
• 分類號(hào): C07K5/087;C07K7/06;C12P21/06;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/14;C07K1/36;A61K38/08;A61P3/10
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 朱朦琪

1.一種鱈魚(yú)皮寡肽，其特征在于，氨基酸序列為Glu-Gly-Gly-Tyr-Thr-Arg。

2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱈魚(yú)皮寡肽的分離純化方法，其特征在于，包括：

(1)以阿拉斯加狹鱈魚(yú)皮為原料，經(jīng)蛋白酶酶解法制備鱈魚(yú)皮膠原肽混合肽；

所述蛋白酶酶解法具體為：

將阿拉斯加狹鱈魚(yú)皮、胰酶與水混合，在52～58℃、pH＝5.5～6.5下酶解6～10h；

以阿拉斯加狹鱈魚(yú)皮的質(zhì)量計(jì)，所述胰酶的加入量為0.15～0.25wt％；

所述阿拉斯加狹鱈魚(yú)皮與水的質(zhì)量比為1：4～8；

(2)采用截留分子量為3000Da的超濾膜對(duì)步驟(1)制備的鱈魚(yú)皮膠原肽混合肽進(jìn)行超濾處理，再經(jīng)濃縮、干燥得到鱈魚(yú)皮膠原肽；

(3)以水為流動(dòng)相，采用葡聚糖凝膠色譜柱對(duì)步驟(2)制備的鱈魚(yú)皮膠原肽進(jìn)行粗分；

所述葡聚糖凝膠色譜柱的填料由葡聚糖凝膠樹(shù)脂Sephadex G-25和葡聚糖凝膠樹(shù)脂Sephadex G-50串聯(lián)而成；所述葡聚糖凝膠樹(shù)脂Sephadex G-25選自100目，葡聚糖凝膠樹(shù)脂Sephadex G-50選自60目；所述流動(dòng)相的流速為0.8～1.4mL/min；

(4)利用高效液相色譜技術(shù)將步驟(3)的粗分產(chǎn)物進(jìn)一步分離，得到三種鱈魚(yú)皮寡肽；

色譜柱：Angilent Eclipse XDB-C₁₈柱；

流動(dòng)相：A液：0.05％三氟乙酸-水溶液；B液：0.05％三氟乙酸-乙腈溶液；

采用線性梯度洗脫，0～20min，5％～20％B；20～25min，20％～100％B；

流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鱈魚(yú)皮寡肽的分離純化方法，其特征在于，步驟(1)中，所述蛋白酶酶解法：

將阿拉斯加狹鱈魚(yú)皮、胰酶與水混合，在55℃、pH＝6.0下酶解8h；

以阿拉斯加狹鱈魚(yú)皮的質(zhì)量計(jì)，所述胰酶的加入量為0.20wt％；

所述阿拉斯加狹鱈魚(yú)皮與水的質(zhì)量比為1：6。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鱈魚(yú)皮寡肽的分離純化方法，其特征在于，步驟(2)中，所述超濾膜選自中空纖維聚砜超濾膜。

5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱈魚(yú)皮寡肽在制備ɑ-葡萄糖苷酶抑制劑中的應(yīng)用。

6.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱈魚(yú)皮寡肽在制備抗Ⅱ型糖尿病藥物中的應(yīng)用。