[發(fā)明專利]Au@Fe3

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910091195.8
• 申請(qǐng)日: 2019-01-30
• 公開（公告）號(hào): CN109682964B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊占軍;胡銳宣;劉靳一蒙;吳昕玥;李娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/531;G01N21/76;B82Y40/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責(zé)任公司 32102
• 代理人: 董旭東;徐素柏

1.一種Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂納米酶檢測(cè)探針的制備方法，包括以下步驟：

A1：制備Au@Fe₃O₄納米粒子：將體積比為（1～1.5）：20的油酸與十八碳烯混合，在N₂流下加熱至120°C保溫20 min，在N₂層下向混合液中注入Fe(CO)₅，使Fe(CO)₅在上述混合液中的濃度為35～40mg/mL,攪拌5 min后，將體積為油酸體積一半的油胺注入反應(yīng)后的混合物中，然后向混合物加入質(zhì)量為Fe(CO) ₅的10—15倍的Au納米顆粒的分散體，混合均勻后，將混合液加熱至300～310 °C回流45 min，冷卻至室溫后，再加入異丙醇將顆粒分離，分離出離散的Au納米顆粒，將分離出Au納米顆粒后的得到的二聯(lián)體Au@Fe₃O₄納米粒子分散到己烷中，使Au@Fe₃O₄的分散濃度為5 mg/mL；

A2：制備Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂納米酶檢測(cè)探針：向步驟A1制得的Au@Fe₃O₄納米顆粒的溶液按體積比為30：（1～1.5）加入濃度為100～200μg/mL二級(jí)抗體Ab₂，緩慢攪拌2h，再在4 °C下以10000 rpm 離心30 min，以去除過量Ab₂捕獲抗體；將離心液沉淀后分散于0.01M 的磷酸鹽緩沖液中；本步上述離心和分散過程至少重復(fù)兩次，最終得到分散濃度為5 mg/mL 的Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂納米酶檢測(cè)探針懸浮分散液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂納米酶檢測(cè)探針的制備方法，所述Au納米顆粒的分散體的制備方法為：將HAuCl₄·3H₂O加入到四氫化萘中配制濃度為2.5～3 mmol/100mL的溶液，再加入體積為四氫化萘體積1/10 的油胺配制成紅色溶液，然后將該溶液在0～70 °C加熱5-6h ，再冷卻至室溫，將乙醇加入到溶液中，通過離心分離金顆粒，并用乙醇洗滌，然后再分散在己烷中，制得分散濃度為10mg/mL的Au納米顆粒的分散體。

3.一種基于權(quán)利要求1或2的Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂納米酶檢測(cè)探針的化學(xué)發(fā)光陣列免疫傳感器檢測(cè)多組分抗原的方法，其特征在于，包括以下步驟：

B1：利用絲網(wǎng)印刷技術(shù)于硅烷化載玻片印制多點(diǎn)位檢測(cè)的反應(yīng)陣列；

B2：將殼聚糖溶液等體積混合不同待分析物的捕獲抗體滴涂于B1步絲網(wǎng)印刷的反應(yīng)陣列的各點(diǎn)位；再用封閉緩沖液封閉活性位點(diǎn)，制得陣列免疫傳感器；

B3：依次向免疫陣列的各點(diǎn)位中分別滴加5μL的與B2步各點(diǎn)位對(duì)應(yīng)的待檢測(cè)抗原和Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂納米酶檢測(cè)探針，溫育后形成穩(wěn)定夾心免疫復(fù)合物，緩沖液清洗吹干后加入化學(xué)發(fā)光底物；

B4：用CCD照相機(jī)積分收集發(fā)光信號(hào)，檢測(cè)各發(fā)光信號(hào)的光強(qiáng)度，根據(jù)各發(fā)光信號(hào)的光強(qiáng)度與抗源濃度的線性關(guān)系，計(jì)算原抗原樣品的濃度。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于Au@Fe₃O₄MNPs-Ab₂納米酶檢測(cè)探針的化學(xué)發(fā)光陣列免疫傳感器檢測(cè)多組分抗原的方法，其特征在于，步驟B1中，絲網(wǎng)印刷的反應(yīng)陣列各檢測(cè)點(diǎn)位的微孔直徑為2mm，邊緣的點(diǎn)位距載玻片邊緣的間距為4～6mm，微孔外緣為綠色的具有疏水作用的絕緣油漆。