[發明專利]含酚酸類成分的中藥注射液中高分子量物質的測定方法

在審

• 申請號: 201910090635.8
• 申請日: 2019-01-30
• 公開（公告）號: CN109709241A
• 公開（公告）日: 2019-05-03
• 發明（設計）人: 王毅;邵青;王嬌嬌
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 韓聰

本發明公開了一種含酚酸類成分的中藥注射液中高分子量物質的測定方法，屬于中藥制劑檢測技術領域。所述測定方法包括：(1)取待測中藥注射液超濾濃縮，利用含三氟乙酸的甲醇水溶液或含三氟乙酸的乙腈水溶液稀釋并定容，制得供試品溶液；(2)取供試品溶液進行液相色譜分析，記錄色譜圖，以相同色譜條件下的標準蛋白分子量物質的色譜峰作為對照，按峰面積歸一化法計算分子量大于5000道爾頓的高分子量物質的占比。本發明采用含三氟乙酸的甲醇水溶液或含三氟乙酸的乙腈水溶液作為含酚酸類化合物的中藥注射液的稀釋劑制備液相色譜分析的供試品溶液，解決了因酚酸類化合物對多肽或蛋白質類高分子量物質檢測的干擾而無法準確測定的問題。

技術領域

本發明涉及中藥制劑檢測技術領域，具體涉及一種含酚酸類成分的中藥注射液中高分子量物質的測定方法。

背景技術

中藥注射劑作為中華民族傳統文化的代表，在人類健康史上發揮著不可替代的作用。中藥注射液系指飲片經提取、純化后制成的供注入人體內的無菌液體制劑，包括溶液型或乳狀液型或混懸型等注射液，但隨著應用的增多，有關臨床不良反應的報道相繼增加，尤其是嚴重的不良反應如過敏性休克、心血管系統不良反應、呼吸系統損傷等。

有學者認為中藥注射液中蛋白質或多肽高分子物質的存在極有可能是引起不良反應的因素之一，在藥劑提取過程中存在部分高分子物質，如蛋白質、多肽等，此類物質一旦引入中藥注射劑成品，將引起中藥注射劑的一系列不良反應或不良事件。因此，亟需建立中藥注射劑中高分子量物質的檢測方法，用于其高分子量物質的控制。

現有的中藥注射劑的高分子量物質的檢測方法基本上是采用葡聚糖凝膠色譜柱HPLC法分析，采用已知分子量的標準物質定位，判斷高分子是否存在或者用于標定分子量的分布區間。目前研究者常通過高效液相體分子排阻色譜法直接分析樣品(中醫藥學報，2013，41，31–32；中國藥學雜志，2014，49，64–67；中國藥業，2014，23，51–52)或采用超濾的方法將樣品富集后進行分析(中國藥品標準，2012，13，1；藥物分析雜志，2016，36，1451–1455)。

據文獻報道，中藥注射劑中含有的酚酸類化合物能夠通過疏水作用和氫鍵等相互作用與蛋白質或多肽結合(Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2017，134，100–107；Plos One，2015，10，e0128919)。而上述常見的測定高分子量物質的方法中溶劑均為水，無法消除酚酸類化合物與蛋白質或多肽的相互作用，進而影響蛋白質或多肽等高分子量物質在凝膠柱中的保留時間和紫外響應，使得無法準確測定。

因此，為了消除樣品中酚酸類化合物對蛋白質或多肽等高分子量物質測定的影響，必須研究建立消除酚酸類化合物干擾的特異樣品預處理方法，以保證有效、準確地測定含酚酸類成分的中藥注射劑中高分子量物質，對含酚酸類成分的中藥注射劑中蛋白質或多肽類高分子量物質的監測，保障用藥安全，具有重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種可有效消除樣品中的酚酸類化合物對蛋白質或多肽等高分子量物質檢測結果影響的供試品制備方法，提高含酚酸類成分的中藥注射液中蛋白質或多肽等高分子量物質檢測準確度。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種含酚酸類成分的中藥注射液中高分子量物質的測定方法，包括以下步驟：

(1)取待測中藥注射液超濾濃縮，利用含三氟乙酸的甲醇水溶液或含三氟乙酸的乙腈水溶液稀釋并定容，制得供試品溶液；

(2)取供試品溶液進行液相色譜分析，記錄色譜圖，以相同色譜條件下的標準蛋白分子量物質的色譜峰作為對照，如供試品色譜中分子量為5000道爾頓的保留時間前有吸收峰，則判定待測中藥注射液中含有多肽或蛋白類高分子量物質，或者按峰面積歸一化法計算分子量大于5000道爾頓的高分子量物質的占比。