[發(fā)明專利]同時測定牛奶中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910090101.5
• 申請日: 2019-01-18
• 公開（公告）號: CN109856271A
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方靈;傅建煒;韋航;蘇德森;吳妙鴻;劉文靜;黃彪
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

本發(fā)明公開了一種QuEChERS?超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用，同時測定牛奶中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類5類38種抗生素殘留量的分析方法。本發(fā)明優(yōu)化了提取溶劑、凈化條件及色譜、質(zhì)譜條件、可實現(xiàn)對多種抗生素的快速、高效及靈敏的檢測，可保障我國食品和環(huán)境安全。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同時測定牛奶中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類5類38種抗生素殘留量的方法。

背景技術(shù)

抗生素主要用于預(yù)防和治療細菌性感染類疾病，以提高生產(chǎn)質(zhì)量和效率，常作為獸藥和飼料添加劑應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中。在奶牛養(yǎng)殖中，抗生素主要用于治療乳牛乳腺炎、腹瀉等疾病。而泌乳期乳牛過量使用抗生素或休藥期不足，可能導(dǎo)致牛奶中抗生素殘留，并通過食物鏈對人類身體健康造成不良影響，如引起胃腸不適、產(chǎn)生過敏反應(yīng)、導(dǎo)致肝功能損害等。此外，濫用抗生素或長期攝入含抗生素食品可能會產(chǎn)生細菌耐藥性，對人類健康危害更加嚴重，同時，抗生素殘留對環(huán)境也產(chǎn)生越來越大的影響。為了保障食品安全，我國農(nóng)業(yè)部第235號公告規(guī)定了動物源性食品中抗生素最大殘留限量（MRL），許多國家及組織也制定了抗生素最大殘留限量，其限量標準也越來越嚴格。因此，建立一種快速、簡便、靈敏的多種抗生素檢測方法十分必要。

目前，抗生素的檢測方法主要有微生物和生物分析方法、酶聯(lián)免疫法、液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。但微生物和生物分析方法、酶聯(lián)免疫法特異性不高，靈敏度較差，液相色譜法存在檢測抗生素種類受限制、檢出限高等缺點。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法成為抗生素殘留檢測分析的一個重要趨勢。由于不同種類抗生素物理性質(zhì)的差異，以及提取和凈化過程的特異性，基質(zhì)復(fù)雜性，以往的研究報道多數(shù)是關(guān)于單一類別抗生素或少數(shù)幾個抗生素的檢測方法，不能適用于樣品快速篩查分析，有一定的局限性。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有牛奶中抗生素多殘留檢測的難題，本發(fā)明提供了一種同時測定牛奶中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種同時測定牛奶中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留量的方法，其包括如下步驟：

一、標準溶液的配制

1）準確稱取14種磺胺類標準品（磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺異惡唑、苯酰磺胺、磺胺二甲基嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺氯噠嗪、磺胺喹惡啉、磺胺地索辛），15種喹諾酮類標準品（丹諾沙星、氧氟沙星、依諾沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、恩諾沙星、氟羅沙星、沙拉沙星、司帕沙星、奧比沙星、雙氟沙星、惡喹酸、氟甲喹），4種四環(huán)素類標準品（強力霉素、四環(huán)素、土霉素、金霉素），3種氯霉素類標準品（氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考），2種大環(huán)內(nèi)酯類標準品（紅霉素、羅紅霉素），分別用甲醇溶解并定容至10mL，得到濃度為1 mg/mL的不同標準品儲備液；

2）準確量取不同標準品儲備液各0.1 mL，置于同一10 mL容量瓶中，加甲醇混勻并定容，配成濃度為10 μg/mL的混合標準品溶液，于-20 ℃密閉下保存；

3）準確移取一定量的混合標準品溶液，配成系列標準品溶液；

二、樣品溶液的制備

1）準確稱取1.00 g待測牛奶樣品至15 mL聚丙烯離心管中，加入5 mL 0.5%（v/v）甲酸乙腈溶液，漩渦震蕩后超聲10 min，再以5000 r/min離心5 min，取上清液；